標題可見光及紫外光分光光度法測定丁香總黃酮含量的研究

　摘要：目的研究可見光及紫外分光光度法測定丁香總黃酮含量的方法。方法可見光分光光度法是以蘆丁為參照品，硝酸鋁作顯色劑，在510 nm波長測定總黃酮含量。紫外分光光度法是以蘆丁為參照品，在359 nm波長測定總黃酮含量。結果可見光法平均回收率是99.46% , 紫外光法是99.13%。RSD分別是1.15 % 和0.90%。結論 紫外分光光度法是一種較理想的測定方法。

　　關鍵詞：丁香； 總黃酮； 可見光分光光度法； 紫外分光光度法

　　丁香Eugenia caryophyllata Thunb.又名丁子香、支解香、公丁香。丁香分布于馬來群島及非洲，我國廣東、廣西等地均有栽培。丁香中含有酚類、β石竹烯、甲基正戊基酮、水楊酸甲酯和黃酮等物質。丁香性溫，味辛, 有溫中、曖腎、降逆的功能 ［1］。目前報道的測定植物中黃酮含量的方法主要是可見光分光光度法［2］，但可見光及紫外光分光光度法測定丁香總黃酮含量的方法未見報道。本文采用可見光與紫外光分光光度法測定丁香中總黃酮含量，并對兩種方法進行了比較，擬尋找一種準確而簡便的測定丁香中黃酮含量的方法。

　　1 儀器與試劑

　　1.1 儀器上�；萜�6010型紫外可見分光光度計；上海二分7230G可見光分光光度計；北京賽多利斯電子分析天平；索氏抽提器；PHILIPS7120S粉碎機。

　　1.2 試劑與樣品蘆丁對照品從廣州中醫藥大學藥物化學研究所購買,蘆丁含量≥98%；其它試劑均為分析純。丁香樣品購于廣州，經粉碎后過60目篩，在60 ℃烘箱干燥6 h后冷卻備用。

　　2 方法

　　2.1 樣品處理精確稱取丁香粉末1.000 0 g，在索氏抽提器中經石油醚脫脂到無色，放冷后轉出石油醚，加入80 ml無水甲醇，抽提至無色。提取液全部轉移到100 ml容量瓶，用無水甲醇定容作為試液待用。

　　2.2 可見光分光光度法標準曲線的制備 精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品250 mg, 用無水甲醇溶解,轉移入250 ml容量瓶中, 用無水甲醇定容，搖勻．精確移取5.00 ml至50 ml容量瓶中，用無水甲醇定容，搖勻。此蘆丁對照品溶液濃度為0.1 mg?ml-1。準確吸取0.1 mg?ml-1蘆丁對照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml,分別置25 ml容量瓶中,各加50 %乙醇至6 ml，分別加5 %亞硝酸鈉溶液1.00 ml，搖勻,放置6 min后分別加10%硝酸鋁溶液1.00 ml，搖勻,放置6 min,再分別加1 %氫氧化鈉溶液10.00 ml，再用50 %乙醇定容，搖勻，放置15 min后,以空白溶液為參比，在波長510 nm處測吸光度，得回歸方程。

　　2.3 可見光分光光度法回收率實驗 精密稱取5份已知總黃酮含量的丁香粉末1.000 0 g,加入一定量的蘆丁對照品,按照2.1所述制得樣品液,按照2.2所述顯色并測定吸光度, 由回歸方程計算總黃酮含量,按回收率＝（實測值－樣品所含的總黃酮）/加入的蘆丁×100 %。

　　2.4 可見光分光光度法樣品的總黃酮含量測定分別準確吸取1.00 ml試液置25 ml容量瓶中, 按照2.2所述顯色并測定吸光度，在510 nm波長處測定吸收度A,由回歸方程計算樣品中總黃酮含量。

　　2.5 紫外光分光光度法標準曲線的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品96.4 mg， 用無水甲醇溶解，轉移入100 ml容量瓶中, 用無水甲醇定容,搖勻．精確移取10.00～100 ml容量瓶中，用無水甲醇定容，搖勻。此蘆丁對照品溶液濃度為0.096 4 mg?ml-1。 準確吸取濃度0.096 4 mg?ml-1蘆丁對照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，6.00 ml， 分別置25 ml容量瓶中, 各加無水甲醇定容，在359 nm處測吸光度，得回歸方程。

　　2.6 紫外光分光光度法回收率實驗精密稱取5份已知總黃酮含量的丁香粉末1.000 0 g,加入一定量的蘆丁對照品,按照2.1所述制得樣品液,用無水甲醇稀釋樣品液，在359 nm處測吸光度，由回歸方程計算總黃酮含量,按回收率＝（實測值－樣品所含的總黃酮）/加入的蘆丁×100 %。

　　2.7 紫外光分光光度法樣品的總黃酮含量測定分別準確吸取1.00 ml試液置25 ml容量瓶中, 用無水甲醇稀釋定容，在359 nm波長處測定吸光度A，由回歸方程計算樣品中總黃酮含量。

　　3 結果

　　3.1 可見光分光光度法將配制好的不同濃度的蘆丁對照品溶液在510 nm波長處測定吸收度A，得回歸方程為：A=-0.011 5 0.020 62C （A為吸光度，C為濃度mg?L-1），相關系數r=0.999 7。這表明蘆丁濃度在4 ～24 mg/L范圍內線性良好。

　　3.2 紫外光分光光度法將配制好的不同濃度的蘆丁對照品溶液在359 nm波長處測定吸收度A，得回歸方程為：A=0.000 405 4 0.027 18C（A為吸光度，C為濃度mg?L-1），相關系數r=0.999 7。這表明蘆丁濃度在4～24 mg/L范圍內線性良好。

　　3.3 樣品的總黃酮含量測定 黃酮類化合物具有特定的紫外吸收帶，其結構中的肉桂酰環產生的Ⅰ帶在300～400 nm內，由苯甲酰環產生的Ⅱ帶在240～285 nm內，不同的黃酮在這兩個吸收帶的吸收強度不同［3］。含黃酮類化合物的原料經一定的提取純化后，可直接于最大吸收波長處測定其吸收度，以蘆丁為對照品對照計算其含量［4］。本實驗選擇蘆丁在Ⅰ帶的最大吸收波長359 nm作為紫外光分光光度法的測量波長。取不同產地的丁香樣品, 分別用可見光分光光度法和紫外光分光光度法對每個樣品平行測定3次,RSD=1.09 %,各個樣品的總黃酮含量結果見表1。

　　表1 不同產地的丁香樣品的總黃酮含量測定結果（略）

　　從表1可見，不同產地的丁香全草的總黃酮含量有一定差異，其中以廣東丁香2號黃酮含量最高,而廣西丁香1號黃酮含量最低。用可見光分光光度法測得的總黃酮含量總是比用紫外光分光光度法測得的總黃酮含量要稍高，這可能因為可見光分光光度法是在強堿性溶液與鋁離子反應后顯色, 而丁香又含酚類,酚羥基在該條件下也能夠與鋁離子結合,在510 nm處也被吸收,這樣就導致測定結果偏高［5］。

　　3.4 回收率實驗 把一定量的蘆丁對照品加入已知總黃酮含量的廣東丁香2號中做回收率實驗，由表2可見，回收率范圍符合定量分析要求。

　　表2 廣東丁香2號回收率實驗結（略）

　　4 結論

　　實驗結果表明，可見光分光光度法和紫外光分光光度法兩種方法測定丁香總黃酮含量都有較好的線性關系。紫外光分光光度法能直接測定黃酮的含量，不需用硝酸鋁顯色，從而能夠避免丁香中酚羥基的干擾，方法簡便準確，是測定丁香總黃酮含量較佳的方法。