標題分光光度法測定6種忍冬藤中綠原酸的含量

【摘要】 目的以綠原酸的含量為指標，測定評價川渝所產忍冬藤的質量。方法采用分光光度法測定。結果測定了川渝6種忍冬藤中綠原酸的含量。結論該方法簡便、準確、重現性好。其結果可對川渝產忍冬藤的合理用藥、質量控制及進一步開發提供參考。

　　【關鍵詞】 忍冬藤； 綠原酸； 分光光度法

　　忍冬藤Caulis Lonicerae為常用中藥，具有清熱解毒,疏風通絡的功效。2005年版《中國藥典》規定忍冬藤為忍冬科Caprifoliaceae植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥莖枝［1］。但在實際使用中，多種金銀花原植物的藤莖（即莖枝）在不同的區域以中藥忍冬藤入藥�！吨腥A本草》記載忍冬藤的來源有忍冬科植物忍冬L. japonica Thunb.、山銀花L. confusa DC.、紅腺忍冬L. hypoglauca Miq.、黃褐毛忍冬L. fulvotomentosa Hsu et S. G.Ｃheng等的莖枝［2］。據作者調研，川渝忍冬藤品種也很復雜。本實驗對川渝主要的6種金銀花原植物的藤莖用分光光度法進行了有效成分綠原酸的含量測定，以期對川渝產忍冬藤的質量控制和開發提供參考。

　　1 儀器、試劑和樣品

　　Lambda35分光光度計（Perkin Elmer），TCQ-250超聲波清洗器（北京醫療設備二廠），Sartrorius BP211D 1/10萬電子分析天平，ZK-82B型電熱真空干燥箱。綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，80℃減壓干燥至恒重），蒸餾水，分析純甲醇。

　　實驗材料為成都中醫藥大學藥學院萬德光教授通過原植物分類學鑒定的6種干燥忍冬藤莖。

　　2 方法與結果

　　2.1 對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品5.87 mg，置于100 ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，配制成58.70 μg/ml的綠原酸溶液。

　　2.2 測定波長的選擇將對照品溶液和供試品溶液在200～400 nm進行掃描，其均在327 nm波長處有最大吸收，故檢測波長選擇為327 nm。

　　2.3 標準曲線的繪制及線性范圍精密吸取綠原酸對照品溶液1，4，8，12，15，20 ml，分別置于50 ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，配制成1.174，4.696，9.392，14.088，17.610，23.480 μg/ml的綠原酸溶液，以甲醇作空白對照，在327 nm波長處測吸收度。以吸收度（A）對進樣濃度（M）進行回歸，得綠原酸線性回歸方程為A=0.039 76M-0.002 7，r=0.999 9 ，線性范圍為1.174～23.480 μg/ml。

　　2.4 供試品溶液的制備精密稱取藥材細粉約0.5 g，加甲醇定容于25 ml容量瓶中，超聲30 min,放置至室溫，滴加甲醇至25 ml，搖勻，精密吸取1 ml上清液用甲醇定溶于25 ml容量瓶中，稀釋倍數為1 250，作為藥材供試品溶液。

　　2.5 精密度實驗將1號樣品制成的供試品溶液，按標準曲線項下操作重復測定6次，RSD為0.31%（n=6），說明精密度良好。

　　2.6 重現性實驗 精密稱取6份同一樣品（1號），各約0.5 g，按供試品溶液制備項下進行制備，按標準曲線項下操作測定，RSD為1.08%（n=6），說明重現性好。

　　2.7 穩定性實驗對1號供試品溶液在0，1，2，3，4，5 h按標準曲線項下操作各測定1次，RSD=0.74%（n=6），說明樣品溶液在5 h內基本穩定。

　　2.8 回收率實驗采用加樣回收法。精密稱定6份1號樣品各約0.25 g，分別精密加入綠原酸對照品0.25，0.50，1.00 mg（3水平共6份），按供試品溶液制備項下進行制備，按標準曲線項下操作。結果見表1。

　　表1 回收率實驗結果（略）

　　2.9 樣品測定按供試品溶液制備項下進行制備，按標準曲線項下操作測定，從回歸方程求得綠原酸的質量，再計算出忍冬藤中綠原酸的含量。結果見表2。

　　3 小結與討論

　　3.1 供試品溶液和對照品綠原酸溶液的紫外掃描圖譜在250 nm～400 nm范圍內一致，證明本實驗所用測定方法確實可行。為了保證測試結果的可比性，材料來源全為植株從上往下數第5～15節之間的藤莖，未采集木栓層已脫落的老藤。所測結果綠原酸含量在0.43%～2.22%之間，相差5倍，主要集中在0.66%～1.22%之間。

　　表2 忍冬藤中綠原酸含量（略）

　　3.2 2005年版《中國藥典》首次規定了用HPLC法測定忍冬藤中綠原酸的含量，并且要求其含量不少于0.1%。本實驗結果遠高于《中國藥典》中的限量要求,這是由于金銀花中有綠原酸的幾種異構體［3］，其原植物忍冬藤中也應該含綠原酸的幾種異構體，分光光度法可測定其總含量［4］，所以本實驗所得結果實為綠原酸類的總含量。