標題高效液相色譜法測定復方麻仁丸中大黃素的含量

復方麻仁丸由火麻仁、大黃、蘆薈、白芍、枳實等七味中藥制成，具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經之功效，我院臨床應用多年，治療大便秘結、習慣性便秘等頗有療效。本文運用高效液相色譜法對其大黃中的大黃素進行了含量測定，為該制劑的質量控制提供快速準確的測定方法。

1 儀器與試藥 

     高效液相色譜儀LC-2100，紫外檢測器UV2100，色譜工作站，電子分析天平；超聲波清洗器聲波儀；大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；復方麻仁丸（30g/瓶）及陰性樣品（本院中藥制劑室，樣品批號：020822，021128，030410）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件 

     色譜柱：C18（4.6mm×250mm，5um）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（80：20：1）；檢測波長：254nm；流速：1ml/min；靈敏度：0.02AUFS；柱溫：25℃；進樣量：20u1；保留時間：13．5分鐘；理論塔板數：以大黃素峰計算應不低于3500。

2．2 供試品溶液制備 

     取復方麻仁丸20粒充分研細，精密稱取細粉5g，置具塞錐瓶中，加稀鹽酸3ml濕潤，精密加入甲醇20ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，超聲處理30min，放冷。再精密稱定重量，用甲醇補足減失的重量，充分振搖，濾過。精密量取續濾液5ml置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，制成供試品溶液；另取缺大黃的陰性樣品同法制得陰性對照液；精密稱取經五氧化二磷干燥24h的大黃素對照品12.5mg置5Oml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每ml含大黃素250ug的對照品溶液。

2．3 線性關系考察 

     精密吸取大黃素對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.Om1分別置lOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取以上各濃度溶液及對照品溶液各20u1，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以大黃素峰面積對其濃度進行線性回歸，得回歸方程A=5.9754×lO000C一8.1135XlO000．R=0.9999（n=6）。結果表明，大黃素進樣量在0.5～5.0ug范圍內與吸收峰面積值呈良好的線性關系。

2．4 精密度試驗 

    精密吸取大黃素對照品溶液（80ug/ml）20ul，分別按上述色譜條件連續重復進樣5次，測得大黃素峰面積RSD值為0.99％。

2．5 穩定性試驗 

     精密吸取新鮮配制的樣品溶液，每隔2h進樣20ul，測得峰面積并計算，結果大黃素的日內RSD為1.5％（n=12），表明樣品溶液在24h內測定結果穩定。

2．6 重復性試驗

     平行稱取同一批號（030410）樣品6份，按“2．2”供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件進樣20ul，測定并計算含量，結果大黃素平均含量為40.50mg/100g，RSD為0.57％。

2．7 干擾試驗 

     取陰性樣品對照液，按上述色譜條件測定，結果可見，樣品色譜中與對照品溶液在相同的保留時間（tR=13.5min）有相似的色譜峰，而陰性樣品無此峰，說明復方麻仁丸的其它成分對大黃素的測定無干擾，且樣品中大黃素與其它成分峰可達到基線分離，分離度大于1.5。

2．8 加樣回收率試驗

      精密稱取已知大黃素含量的復方麻仁丸（批號030410）細粉約2.5g，共6份，2份為一組，每一組分別加入大黃素對照品溶液（72.6ug/ml、96.8ug/ml、121.0ug/ml）各10ml，按“2．2”供試品溶液項下制備，依上述色譜條件測定大黃素含量并計算回收率。

2．9 樣品測定 

     取三個批號的樣品，分別按“2．2”項下方法制得供試品溶液，依上述色譜條件，注入高效液相色譜儀，外標峰面積法計算樣品中大黃素的含量。

3 討論 

3．1 色譜條件選擇 

     參考有關文獻，對大黃素對照品溶液在200～400nm波長范圍內掃描，結果在254nm波長處有最大吸收且靈敏度最高，故選擇254nm為檢測波長；經多種比例流動相選擇，認為甲醇-水-冰醋酸（80：20：1）最佳，此條件下可免除干擾，使樣品中的大黃素分離度好，峰形尖銳。

3．2 提取方法研究

     樣品提取先后采用了加熱回流提取、甲醇24h冷浸、鹽酸-甲醇（3：20）超聲處理等方法，結果發現鹽酸-甲醇（3：20）超聲處理30min測得的大黃素含量較高，且操作簡便。