標題三聚氰胺檢測方法三氣相色譜-質譜聯用法

氣相色譜-質譜法的定量限為0.05 mg/kg（其中氣相色譜-質譜/質譜法的定量限為0.005 mg/kg）

第三法氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS和GC-MS/MS）
5.1 原理
試樣經超聲提取、固相萃取凈化后，進行硅烷化衍生，衍生產物采用選擇離子監測質譜掃描模式
（SIM）或多反應監測質譜掃描模式（MRM），用化合物的保留時間和質譜碎片的豐度比定性，外標
法定量。
相對離子豐度>50% >20%至50% >10%至20% ≤10%
允許的相對偏差±20% ±25% ±30% ±50%
GB/T 22388—2008
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5.2 試劑與材料
除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。
5.2.1 吡啶：優級純。
5.2.2 乙酸鉛。
5.2.3 衍生化試劑：N,O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）＋三甲基氯硅烷（TMCS）（99＋1），
色譜純。
5.2.4 乙酸鉛溶液（22 g/L）：取22 g 乙酸鉛用約300 mL 水溶解后定容至1 L。
5.2.5 三聚氰胺標準溶液：準確吸取三聚氰胺標準儲備液（3.2.12）1 mL 于100 mL 容量瓶中，用甲醇
定容至刻度，此標準溶液1 mL 相當于10 μg 三聚氰胺標準品，于4℃冰箱內儲存，有效期3 個月。
5.2.6 氬氣：純度大于等于99.999％。
5.2.7 氦氣：純度大于等于99.999％。
5.2.8 其他同3.2。
5.3 儀器和設備
5.3.1 氣相色譜-質譜（GC-MS）儀：配有電子轟擊電離離子源（EI）。
5.3.2 氣相色譜-質譜/質譜（GC-MS/MS）儀：配有電子轟擊電離離子源（EI）。
5.3.3 電子恒溫箱。
5.3.4 其他同3.3。
5.4 樣品處理
5.4.1 GC-MS法
5.4.1.1 提取
5.4.1.1.1 液態奶、奶粉、酸奶和奶糖等
稱取5 g（精確至0.01 g）樣品于50 mL具塞比色管，加入25 mL三氯乙酸溶液（3.2.8），渦漩振蕩30 s，
再加入15 mL三氯乙酸溶液，超聲提取15 min，加入2 mL乙酸鉛溶液（5.2.4），用三氯乙酸溶液定容至
刻度。充分混勻后，轉移上層提取液約30 mL至50 mL離心試管，以不低于4000 r/min離心10 min。上清
液待凈化。
5.4.1.1.2 奶酪、奶油和巧克力等
稱取5 g（精確至0.01g）樣品于50 mL具塞比色管中，用5 mL熱水溶解（必要時可適當加熱），再加
入20 mL三氯乙酸溶液（3.2.8），渦漩振蕩30 s，再加入15 mL三氯乙酸溶液超聲提取及以下操作同
5.4.1.1.1。若樣品中脂肪含量較高，可以先用乙醚脫脂后再用三氯乙酸溶液提取。
5.4.1.2 凈化
準確移取5 mL的待凈化濾液至固相萃取柱（3.2.13）中。再用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，棄淋洗液，
抽近干后用3 mL氨化甲醇溶液（3.2.9）洗脫，收集洗脫液，50℃下氮氣吹干。
5.4.2 GC-MS/MS法
5.4.2.1 奶粉、奶酪、奶油、巧克力和奶糖等
稱取0.5 g（精確至0.01 g）試樣，加入5 mL甲醇水溶液（3.2.7），渦旋混勻2 min后，超聲提取15 min ~20
min，以不低于4000 r/min離心10 min，取上清液200 μL用微孔濾膜（3.2.16）過濾，50℃下氮氣吹干。
5.4.2.2 液態奶和酸奶等
稱取1 g（精確至0.01 g）試樣，加入5 mL甲醇，渦旋混勻2 min后，超聲提取及以下操作同5.4.2.1。
5.4.3 衍生化
取上述氮氣吹干殘留物，加入600 μL的吡啶和200 μL衍生化試劑（5.2.3），混勻，70℃反應30 min
后，供GC-MS或GC-MS/MS法定量檢測或確證。
GB/T 22388—2008
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5.5 氣相色譜-質譜測定
5.5.1 儀器參考條件
5.5.1.1 GC-MS參考條件
a） 色譜柱：5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛細管柱，30 m×0.25 mm（i.d.）×0.25 μm，或相當者。
b） 流速：1.0 mL/min。
c） 程序升溫：70℃保持1 min，以10℃/min 的速率升溫至200℃，保持10 min。
d） 傳輸線溫度：280℃。
e） 進樣口溫度：250℃。
f） 進樣方式：不分流進樣。
g） 進樣量：1 μL。
h） 電離方式：電子轟擊電離（EI）。
i） 電離能量：70 eV。
j） 離子源溫度：230℃。
k） 掃描模式：選擇離子掃描，定性離子m/z 99、171、327、342，定量離子m/z 327。
5.5.1.2 GC-MS/MS 參考條件
a） 色譜柱：5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛細管柱，30 m×0.25 mm（i.d.）×0.25 μm，或相當者。
b） 流速：1.3 mL/min。
c） 程序升溫：75℃保持1 min，以30℃/min 的速率升溫至220℃，再以5℃/min 的速率升溫至250℃，
保持2 min。
d） 進樣口溫度：250℃。
e） 接口溫度：250℃。
f） 進樣方式：不分流進樣。
g） 進樣量：1 μL。
h） 電離方式：電子轟擊電離（EI）。
i） 電離能量：70 eV。
j） 離子源溫度：220℃。
k） 四級桿溫度：150℃。
l） 碰撞氣：氬氣，1.8 mTorr。
m） 碰撞能量：15 V。
n） 掃描方式：多反應監測（MRM），定量離子m/z 342>327，定性離子m/z 342>327，342>171。
5.5.2 標準曲線的繪制
5.5.2.1 GC-MS法
準確吸取三聚氰胺標準溶液（5.2.5）0、0.4、0.8、1.6、4、8、16 mL 于7 個100 mL 容量瓶中，用
甲醇稀釋至刻度。各取1 mL 用氮氣吹干，按照5.4.3 步驟衍生化。配制成衍生產物濃度分別為0、0.05、0.1、
0.2、0.5、1、2 μg/mL 的標準溶液。反應液供GC-MS 測定。以標準工作溶液濃度為橫坐標，定量離子
質量色譜峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。標準溶液的GC-MS 選擇離子質量色譜圖參見附錄A 中
的圖A.3，三聚氰胺衍生物選擇離子質譜圖參見附錄A 中的圖A.4。
5.5.2.2 GC-MS/MS法
準確吸取三聚氰胺標準溶液（5.2.5）0、0.04、0.08、0.4、0.8、4、8 mL分別于7個100 mL容量瓶中，
用甲醇稀釋至刻度。各取1 mL用氮氣吹干，按照5.4.3步驟衍生化。配制成衍生化產物濃度分別為0、0.005、
0.01、0.05、0.1、0.5、1 μg/mL的標準溶液。反應液供GC-MS/MS測定。以標準工作溶液濃度為橫坐標，
定量離子質量色譜峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。標準溶液的GC-MS/MS多反應監測質量色譜圖
參見附錄A中的圖A.5。
5.5.3 定量測定
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待測樣液中三聚氰胺的響應值應在標準曲線線性范圍內，超過線性范圍則應對凈化液稀釋，重新衍
生化后再進樣分析。
5.5.4 定性判定
5.5.4.1 GC-MS 法
以標準樣品的保留時間和監測離子（m/z 99、171、327 和342）定性，待測樣品中4 個離子（m/z
99、171、327 和342）的豐度比與標準品的相同離子豐度比相差不大于20%。
5.5.4.2 GC-MS/MS 法
以標準樣品的保留時間以及多反應監測離子（m/z 342>327、342>171）定性，其他定性判定原則
同4.5.5。
5.5.5 結果計算
同3.5.4。
5.6 空白實驗
除不稱取樣品外，均按上述測定條件和步驟進行。
5.7 方法定量限
本方法中，氣相色譜-質譜法（GC-MS法）的定量限為0.05 mg/kg，氣相色譜-質譜/質譜法（GC-MS/MS
法）的定量限為0.005 mg/kg。
5.8 回收率
GC-MS法：在添加濃度0.05 mg/kg～2 mg/kg濃度范圍內，回收率在70%～110%之間，相對標準偏
差小于10%。
GC-MS/MS法：在添加濃度0.005 mg/kg～1 mg/kg濃度范圍內，回收率在90%～105%之間，相對標
準偏差小于10%。
5.9 允許差
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。

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