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              標題PCR擴增儀的選擇一

                 

              提供者:長沙駿逸實驗儀器有限公司    發布時間:2009/4/1   閱讀次數:730次 >>進入該公司展臺

              1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上發表文章首次準確、精煉、客觀的闡述了PCR方法,1976年一種從嗜熱水生菌(Thermus aquaticus)分離得到的熱穩定的DNA依賴的DNA聚合酶的應用大大增加了PCR的效率。而現今所發展出來的PCR則是源于由Saiki和Mullis等人于1988年發表在Science上的一篇論文,Mullis當時服務于Perkin Elmer(PE)公司,因此PE公司在PCR界有著特殊的地位。后來PE被Applied Biosystems Inc.(ABI)公司收購、分拆、再轉賣,而PCR的專利和倍受信賴的PCR儀器生產和銷售就留在ABI名下。到如今,PCR方法愈發趨向自動化,并從中衍生出更多的新技術方法,可以說,PCR技術是支撐現代分子生物學發展的一塊重要基石。這種技術的廣泛應用催生了一個龐大的市場,多個公司均有各種類型的商品化PCR儀出售。PCR的專利目前依然掌握在ABI和Roche(羅氏)兩大公司手中,去年業界頗為引人矚目ABI訴MJ公司侵犯侵犯PCR儀知識產權案最終以MJ敗訴并宣布破產、最終被Bio-rad收購暫告一段落。其后還會不會有后繼的故事還需拭目以待。

              PCR原理

              DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶的作用下,以單鏈為模版,根據堿基互補配對原則復制成新的單鏈,與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計與模板DNA的5’端結合的兩條引物,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制,多次重復“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環就可以以幾何級數大量擴增特定的基因。

              發現耐熱DNA聚合酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該類酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。

              從PCR原理可以看出,PCR儀的關鍵是升降溫的步驟,F在偶爾還能聽到一些前輩們笑談早年的PCR實驗如何在3個水浴鍋中完成的趣聞。經過不斷改進,今天的PCR已經越來越完善和智能化。出于市場推廣的戰略需要,各廠家的PCR儀型號不同,著力宣傳的技術指標和參數也不盡統一,生物通的編者在這里簡單列出選購時我們認為應該考慮的常用指標,希望有助于大家選購PCR儀的選購技巧。

              PCR儀介紹及其選購

              PCR儀的種類總體來說可以分為兩大類:PCR擴增儀和實時熒光定量PCR儀,普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀、和帶原位擴增功能的原位PCR儀等等。1996年由ABI公司首先推出將擴增和檢測融為一體的實時熒光定量PCR儀,此后很多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量PCR儀.

              關鍵詞:PCR擴增儀    

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