標題庚型肝炎病毒檢測

庚型肝炎病毒（HGV）呈世界性分布，與人類急性和（或）慢性肝炎有關。主要以血液途徑傳播，如輸血及血制品、靜脈吸毒、使用污染的注射器、經常接觸血源等。HGV為單股正鏈RNA病毒，基因組全長9 392個核苷酸�；�因結構分為：5’非編碼區、編碼區（結構區和非結構區）、3’非編碼區，結構區編碼核心蛋白和包膜蛋白，非結構區有NSl、NS2、NS3、NS4、NSs等5個區，其中NS2編碼蛋白酶。庚型肝炎病毒（HGV）實驗室檢測指標主要為HGVAb-IgG。
[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 庚型肝炎病毒（HGV）特異性抗原預包被于微孔板條上，樣品加入已有樣品稀釋液的反應孔中，在隨后的溫育過程中，若樣品中含特異性抗體（HGVAb—IgG），則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到微孔板上，再加入酶標記的第2抗體，最終形成抗原—抗體—酶標記第2抗體復合物，洗滌除去未結合的游離酶，加入顯色劑后顯色。反之，若樣品中不含特異性抗體（HGVAb-IgG），則加入顯色劑后不顯色。
[標本準備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．包被反應板
2．樣品稀釋液
3．陰性對照
4．陽性對照
5．洗滌劑
6．酶標記第2抗體
7．顯色劑A、B
8．終止液
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
[測定步驟]
1．用加樣器在微孔反應條中加入樣品稀釋液，每孔100ul。
2．將待測標本各l0ul分別加人已有樣品稀釋液的各孔中，直接加陰性對照、陽性對照各100u1，設空白對照1孔。
3．充分混勻，37℃環境中溫育20min。
4．傾去內容物，用洗滌液洗板5次，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
5．各孔加入酶標記第2抗體100fA，振蕩混勻。
6．傾去內容物，用洗滌液洗板5次，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
7．每孔加入顯色劑A、B各1滴，顯色10min。
8．終止顯色后，在酶標儀上比色（波長為450nm），樣品吸光度大于陰性對照2．1倍者為陽性。
[注意事項]
1．試劑盒從冷藏環境中取出時應置室溫平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存，溫育酶標板的時間和溫度必須嚴格控制。
2．加液時必須用移液器，并經常校對移液器的準確性。
3．洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內有游離酶不能洗凈。使用洗板機洗滌應設定30～60s浸泡時間。
4．所有樣品和廢棄物都應按傳染源處理，終止液為2mol／L的硫酸，使用時必須注意安全。
5．操作過程中禁止將預包被微孔板與其他試劑、次氯酸類消毒劑接觸。
[正常參考值] HGVAb-IgG陰性
[臨床意義] HGVAb-IgG陽性是對HGV進行診斷的重要依據。HGVAb-IgG持續時間較長，具有流行病學調查意義