標題紫外分光光度法測定蛋白質含量

摘要：

考馬斯亮蘭G250與蛋白質結合，在0－1000ug/ml范圍內，于波長595nm處的吸光度與蛋白質含量成正比，可用于蛋白質含量的測定�？捡R斯亮蘭G250與蛋白質結合迅速，結合產物在室溫下10分鐘內較為穩定，是一種較好的蛋白質定量測定方法。

1. 實驗部分

1.1 儀器與試劑：

Labtech UV POWER紫外分光光度計；玻璃比色皿一套；考馬斯亮藍G250；

牛血清蛋白；超純水。

1.2 試液的制備：

牛血清蛋白標準溶液（1000ug/ml）的制備 稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超純水溶解并定容。

考馬斯亮蘭G250試劑  稱取100mg考馬斯亮蘭G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀釋至1升。

2. 結果與討論

2.1 校正曲線的繪制

 準確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標準溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中，然后用超純水補充到0.1ml，各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑，混合均勻后，即可依次在595nm處測定吸光度。以濃度

為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制校正曲線如下圖，校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

2.2  精密度

配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考馬斯亮蘭溶液連續進樣6次，得到吸光度的相對標準偏差。

表1 精密度測定結果

2.3  穩定性

取1mg/ml牛血清蛋白標準溶液每十分鐘測定一次，50分鐘內的吸光度變化如下表2。

表2 穩定度測定結果

3. 結論

     該方法測定快速、簡便，干擾物少，是目前靈敏度較高的蛋白質含量測定的紫外分光光度法。v