標題彩色免疫金銀法（CIGSS）

彩色免疫金銀法（colouredIGSS簡稱CIGSS）是在IGSS基礎上發展起來的一種新方法。其基本原理與彩色顯影相似。IGSS方法染色在抗原位點處生成銀顆粒經鐵氰化鉀與溴化鉀的作用即被氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑相接觸立即被還原成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產物使彩色成色劑由無色變成有色的染料并沉積在銀顆粒的部位，金屬銀變成了銀離子。由于染料只能通過彩色顯影劑沉積在有銀的部位，所以不與組織發生非特異性吸附。

以彩色顯影人肝組織內HBsAg的操作過程為例：

（1）脫蠟至水。

（2）0.1%胰蛋白酶37℃10min。

（3）Lugol‘s，碘液5min。

（4）5%硫代硫酸鈉1min。

（5）用0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，兩次。

（6）1%卵白蛋白封閉10min。

（7）馬抗HBsAg抗體1：1000稀釋，37℃1~2h或4℃過夜。

（8）0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，兩次。

（9）1%卵白蛋白封閉10min。

（10）PAg1：40，37℃45min。

（11）0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，兩次。

（12）雙蒸水洗5min，兩次。

（13）物理顯影

（14）自來水沖洗。

（15）雙蒸水洗5min，兩次。

（16）2%鐵氰化鉀和1%溴化鉀，1min。

（17）雙蒸水沖洗。

（18）彩色顯影（ -萘酚或菲尼酮）2min。

（19）雙蒸水沖洗。

（20）2%鐵氰化鉀和1%溴化鉀，1min。

（21）2%鐵硫代酸鈉和1%亞硫酸鈉，5min。

（22）流水沖洗。

（23）如需要可用蘇木素或核紅復染。

（24）緩沖甘油封固，觀察。

結果：CIGSS的優點：①陽性結果比黑色更鮮明；②可以使弱信號得到放大；③消除IGSS背景染色；④信號/背景比值高；⑤是開展免疫金銀雙標技術的新途徑.光鏡下見HBsAg陽性物質呈鮮艷的藍色（ -萘酚為成色劑）或呈綠色（菲尼酮為成色劑）。背景干凈，陽性結果清楚。

彩色顯影背景過染的處理方法

彩色免疫金銀法，在膠體金技術中是一個很大的突破，它的優點是結果鮮明，對比度好，但是在彩色顯影過程中時間過長，背景可有一些著色，彩色顯影的時間控制很重要。一旦過染可用以下方法處理。

（1）純酒精滴到切片上3~5s，立即沖掉，水洗，充分地把酒精洗掉，如果洗不徹底，造成陽性結果脫色。

（2）75%的酒精滴到切片上1min，立即沖掉，脫色不能時間過長，過長后陽性結果全部脫掉。