標題現貨隱性孔雀石綠ELISA試劑盒使用說明書

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本試劑盒僅供研究使用。
1  使用目的 使用目的 使用目的 使用目的： ：： ：
本試劑盒用于水產樣品，水樣中隱性孔雀石綠殘留的定量檢測。
2  實驗原理 實驗原理 實驗原理 實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法，在微孔板包被有隱性孔雀石綠偶聯抗原，加入隱
性孔雀石綠標準品或樣品，游離隱性孔雀石綠與微孔條上預包被的隱性孔雀石綠偶聯抗原互
相競爭抗隱性孔雀石綠抗體酶標記物，用 TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變為黃
色，用酶標儀在 450nm 波長下進行檢測，吸光值與樣品中隱性孔雀石綠含量成反比，通過
標準曲線計算樣品中隱性孔雀石綠的含量。 隱性孔雀石綠ELISA試劑盒使用說明書    
3  試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成  
3.1  預包被的隱性孔雀石綠偶聯抗原的可拆酶標板：1 塊（12孔×8 條）。
3.2  隱性孔雀石綠標準品：6 瓶（1ml/瓶），含量分別是：0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7
ppb,8.1 ppb
3.3 抗隱性孔雀石綠抗體酶結合物：1瓶（6ml）。
3.4 顯色液A：1瓶（6ml）。
3.5 顯色液B：1 瓶（6ml）。
3.6 終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7 樣本稀釋液：1瓶（10×,    6ml），用于樣品稀釋用。 
隱性孔雀石綠ELISA試劑盒使用說明書3.8 濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9 說明書一份。
4  需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 需要而未提供的材料
4.1  設備
4.1.1波長450nm酶標儀。  
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相當的濾紙。
4.1.7微量移液器。
4.2  試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5  貯存 貯存 貯存 貯存
5.1  試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
5.2  未用完的微孔板應該密封干燥保存
6  注意事項 注意事項 注意事項 注意事項
6.1  使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2  不要使用過期試劑盒。   2
6.3  試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
6.4  標準品中含有黃曲霉素，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
6.5  終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6  不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
6.7  不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響
實驗結果。
6.8  稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果
6.9  混合試劑時應避免起泡。
7  工作液準備 工作液準備 工作液準備 工作液準備
7.1  隱性孔雀石綠標準品溶液：0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb
7.2  濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用
7.3  樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用
7.3  顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4  反應終止液：已備用
8  樣品處理程序 樣品處理程序 樣品處理程序 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則
會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加  20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman No 1濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品，加入25µl樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）
9  酶免分析步驟 酶免分析步驟 酶免分析步驟 酶免分析步驟
9.1  實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時�；販刂潦�
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用精確的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
9.2  分析步驟
9.2.1 預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50,l的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結合物
9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。  
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液
體。   3
9.4  反應
9.4.1  洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A，再加  50µl顯
色液B；輕微晃動反應板使之徹底混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度，結果在5min內讀取。
10  結果計算 結果計算 結果計算 結果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）
的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L標準溶液的平均吸光度值
10.1.2以隱性孔雀石綠濃度的對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。根據樣
品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為隱性孔雀石綠濃度的對數值，求得
反對數即為測定液中隱性孔雀石綠濃度C（μg/ml）
10.1.3由于樣品經過了預先稀釋，因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數。  
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品吸光
度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品顏色
深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
11  特異性 特異性 特異性 特異性
物質 交叉反應
隱性孔雀石綠100%
結晶紫：  90%
孔雀石綠：0.4%            
隱性結晶紫：＜0.05%
12  試劑盒參數 試劑盒參數 試劑盒參數 試劑盒參數
本試劑盒檢測下限為0.05ppb
B0吸光度最佳值應大于1.0
試劑盒吸光度板內誤差小于8％，板間誤差小于15％。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。
13  標準曲線模式 標準曲線模式 標準曲線模式 標準曲線模式（ （（ （僅供參考 僅供參考 僅供參考 僅供參考） ）） ）
試 劑 盒 提 供 的 標 準 曲 線 范 圍 為 0.1ppb~8.1ppb 。  4
 
 
14  分析限制 分析限制 分析限制 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。 
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