標題粗脂肪含量的測定-索氏抽提法

一、目的
脂肪廣泛存在于許多植物的種子和果實中,測定脂肪的含量,可以作為鑒別其品質優劣的一個指標.脂肪含量的測定有很多方法,如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、電測和核磁共振法等.目前國內外普遍采用抽提法,其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公認的經典方法,也是我國糧油分折首選的標準方法.通過本實驗的學習,掌握索氏抽提法測定粗脂肪含量的原理和操作方法.
二、原理
本實驗采用索氏抽提法中的殘余法,即用低沸點有機溶劑（乙醚或石油醚）回流抽提,除去樣品中的粗脂肪,以樣品與殘渣重量之差,計算粗脂肪含量.由于有機溶劑的抽提物中除脂肪外,還或多或少含有游離脂肪酸、甾醇、磷脂、蠟及色素等類脂物質,因而抽提法測定的結果只能是粗脂肪.
三、實驗材料、主要儀器和試劑
1、實驗材料
油料作物種子、中速濾紙
2、儀器：

1）索氏脂肪抽提器（圖1）或YG-Ⅱ型油分測定器
2）干燥器（直徑15-18cm,盛變色硅膠）
3）不銹鋼鑷子（長20cm）
4）培養皿
5）分析天平（感量0.001g）
6）稱量瓶
7）恒溫水浴
8）烘箱
9）樣品篩（60 目）
3、試劑
無水乙醚或低沸點石油醚（A.R.）

四、操作步驟
1、準備工作
將濾紙切成8cm×8cm,疊成一邊不封口的紙包,用硬鉛筆編寫順序號,按順序排列在培養皿中.將盛有濾紙包的培養皿移入105±2℃烘箱中干燥2h,取出放入干燥器中,冷卻至室溫.按順序將各濾紙包放人同一稱量瓶中稱重（記作a）、稱量時室內相對濕度必須低于70%.
2、包裝和干燥
在上述已稱重的濾紙包中裝入3g 左右研細的樣品,封好包口,放入105±2℃的烘箱中干燥3h,移至干燥器中冷卻至室溫.按順序號依次放入稱量瓶中稱重（記作b）.
3、抽提
將裝有樣品的濾紙包用長鑷子放入抽提筒中,注入一次虹吸量的1.67 倍的無水乙醚,使樣品包完全浸沒在乙醚中.連接好抽提器各部分,接通冷凝水水流,在恒溫水浴中進行抽提,調節水溫在70-80℃之間,使冷凝下滴的乙醚成連珠狀（120-150 滴/min 或回流7次/h 以上）,抽提至抽取筒內的乙醚用濾紙點滴檢查無油跡為止（約需6-12h）.抽提完畢后,用長鑷子取出濾紙包,在通風處使乙醚揮發（抽提室溫以 12-25℃為宜）.提取瓶中的乙醚另行回收.
4、稱重
待乙醚揮發之后,將濾紙包置于105±2℃烘箱中干燥2h,放入干燥器冷卻至恒重為止（記作c）.
五、結果與計算

式中：
a:稱量瓶加濾紙包重（g）
b:稱量瓶加濾紙包和烘干樣重（g）
c:稱量瓶加濾紙包和抽提后烘干殘渣重（g）
六、附注
1）測定用樣品、抽提器、抽提用有機溶劑都需要進行脫水處理.
這是因為：第一,抽提體系中有水,會使樣品中的水溶性物質溶出,導致測定結果偏高；第二,抽提體系中有水,則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚,可飽和約2%的水）,從而影響抽提效率；第三,樣品中有水,抽提溶劑不易滲入細胞組織內部,結果不易將脂肪抽提干凈.
2）試樣粗細度要適宜.試樣粉末過粗,脂肪不易抽提干凈；試樣粉末過細,則有可能透過濾紙孔隙隨回流溶劑流失,影響測定結果.
3）索氏抽提法測定脂肪最大的不足是耗時過長,如能將樣品先回流1-2 次,然后浸泡在溶劑中過夜,次日再繼續抽提,則可明顯縮短抽提時間.
4）YG-Ⅱ型油分測定器容量大,適合于樣品較多的選種鑒定工作使用,溫度控制在70℃左右,8h 可提取完畢.
5）必須十分注意乙醚的安全使用.抽提室內嚴禁有明火存在或用明火加熱.乙醚中不得含有過氧化物,保持抽提室內良好通風,以防燃爆.乙醚中過氧化物的檢查方法是：取適量乙醚,加入碘化鉀溶液,用力搖動,放置1min,若出現黃色則表明存在過氧化物,應進行處理后方可使用.處理的方法是：將乙醚放入分液漏斗,先以1/5 乙醚量的稀KOH溶液洗滌2-3 次,以除去乙醇；然后用鹽酸酸化,加入1/5 乙醚量的FeSO4 或Na2SO3 溶液,振搖,靜置,分層后棄去下層水溶液,以除去過氧化物；最后用水洗至中性,用無水CaCl2 或無水Na2SO4 脫水,并進行重蒸餾.