標題土壤DNA快速提取試劑盒的使用方法

 

　　MP土壤DNA快速提取試劑盒，可在30分鐘之內，快速、有效地從土壤以及其他環境樣品中提取基因組DNA。適用于從土壤中的所有生物包括G+細菌、酵母菌、真菌、藻類、線蟲類甚至真細菌的孢子、芽孢中提取基因組DNA。而且它還可以提取其他環境樣品的DNA，如沉積物、排泄物、廢水、雪水等。只需500mg的樣品即可得到足夠的DNA。實驗原理為用特殊的裂解介質E處理樣品，之后使用自旋過濾器基于硅吸附DNA原理的GENECLEAN®步驟進行純化，得到的DNA可用于PCR、限制性酶切、電泳及其他下游實驗。

　　很多用戶對于我們代理的MP土壤DNA快速提取試劑盒的提取方法不是很清楚，特別是對于沒有FastPrep®儀器的情況下，更是感到無從下手。為了解決用戶的煩惱，特整理了Fast DNA® SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取試劑盒的提取方法，分享給大家，只需按照步驟操作，即使沒有FastPrep®儀器的情況下，也可以快速提取土壤DNA！

　　1、稱取0.3 g~0.4 g樣品加入Lysing Matrix E Tube 中。（注意：需保證加完樣品及所需溶液后，管中應留出不少于200 μL 空間）  
2、加入978 μL SPB，加入122 μL MT Buffer。  
3、蓋緊Lysing Matrix E Tube的蓋子，將離心管置于渦旋混合儀上，對管內物質進行震蕩破碎均質化，時間設定為40 s~50 s。（注意：時間不可過長，有可能打斷基因組DN段降低提取質量）從各個角度都可以震蕩一下，不要光是底部。  
4、在8000 r/min轉速下離心15 min，有利于去除體積較大或具有復雜細胞壁結構的樣品碎屑。  
5、將上清液用大口槍頭吸出轉入1.5 mL的微離心管中，加入250 μL PPS，手持離心管晃動10次以混勻。  
6、在8000 r/min下離心5 min，用大口槍頭將上清液轉移至5 mL離心管中。  
7、搖勻Binding Matrix后，吸取1.0 mL加入上一步離心管中。  
8、將離心管上下顛倒2 min后，靜置3 min，使DNA附著于Bingding Matrix上，并等待二氧化硅基質沉淀。（這一步根據沉淀情況時間可以適當延長） 
10、將剩余的上清液與沉淀物重新混勻，吸取約600 μL混合液移入SPIN Filter中，8000 r/min下離心1 min。  
11、倒掉收集管中的液體，重復上一步操作直至5 mL離心管中的液體吸盡。 
12、加入已制備好的SEWS-M溶液500 μL，用小槍頭小心混勻后，8000 r/min下離心1 min后，棄去收集管中的液體。  
13、為更好的去除雜離子，重復第12步，更換為1.5 mL離心管。
14、在8000 r/min下離心2 min，去除殘留的SEWS-M溶液，然后更換為干凈的1.5 mL離心管。（若發現殘余溶液較多，可重復此步驟）
15、在室溫下，將SPIN Filter風干5 min。（時間可以更久一些） 
16、往SPIN Filter加入80 μL DES溶液，用小槍頭小心使之與Binding Matrix 混勻，65℃水浴15 min（有利于DNA的溶出）。8000 r/min下離心2 min，可得到約50 μL的DNA溶液。再加入80 μL DES溶液重復第16步操作，一共可得到約100 μL的DNA溶液。
17、棄去SPIN Filter，將提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。

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