標題小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）試劑盒使用說明書

檢測范圍：96T
1μg/L -16μg/L

使用目的：
        本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中血管生成素2（ang-2）含量。
小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）試劑盒實驗原理
        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠血管生成素2（Ang-2）水平。用純化的小鼠血管生成素2（Ang-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加血管生成素2（Ang-2），再與HRP標記的血管生成素2（Ang-2）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管生成素2（Ang-2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠血管生成素2（Ang-2）濃度。
小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）試劑盒試劑盒組成
        1 20倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7 終止液3ml×1瓶
        2 酶標試劑3ml×1瓶8 標準品（32μg/L）0.5ml×1瓶
        3 酶標包被板12孔×4條9 標準品稀釋液1.5ml×1瓶
        4 樣品稀釋液3ml×1瓶10 說明書1份
        5 顯色劑A液3ml×1瓶11 封板膜2張
        6 顯色劑B液3ml×1/瓶12 密封袋1個
標本要求
       1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
       2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）試劑盒操作步驟
       1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
16μg/L 5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
8μg/L 4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
4μg/L 3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
2μg/L 2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1μg/L 1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

         2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
        3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
        4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
        5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
        6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
        7. 溫育：操作同3。
        8. 洗滌：操作同5。
        9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
       10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
       11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。