標題質粒DNA醇化一

 
  
 質粒DNA醇化一
 
 
 從質粒DNA制品中去除RNA

對于某些用場（例如用BAL31進生存化或用T4噬菌體多核苷酸激酥標記質粒DNA的限止切斷片的5＇端）,務必取得無RNA污染的DNA制品。盡管在經過氯化銫-溴化乙錠梯度均衡離心所制備的質粒DNA中,這么的RNA污染物的品質很少,但那里面的RNA分子數卻有可能相當可觀,并可在限止酶克化反響的所有5＇端中占領較大的比例。經過下述辦法,可以從質粒制品中去除RNA。經過Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B施行層析

1、制備質粒DNA。

2、有等大小的經TE（pH8.0）均衡后的酚抽提1次真空干燥箱。

3、當使聚在一起到15份時,關閉柱底部,為明確質粒DNA的散布事情狀況,可在每份使聚在一起物中取10μg樣品,經過0.7百分之百石花膠糖凝膠電泳或溴化乙錠熒光施行剖析。

4、將DNA裝入層柱并在柱的上部連署上含0.1百分之百SDS的TE（pH8.0）的貯液瓶,迅即著手以0.5ml流出液為1流施行使聚在一起。

5、將至多1ml的水相鋪在經TE（pH8.0）和0.1百分之百SDS均衡的Bio-Gel A-150m或Sepharase CL-4B（1x10cm）柱上。

6、將含質粒DNA的組成合并在一塊兒,加2倍大小的酒精于4℃沉淀10min,而后以4℃大于10 000rpm離心15min,以回收DNA。