標題豬偽狂犬病毒gE抗體（IgG）ELISA診斷試劑盒說明書

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【產品名稱】
通用名稱：豬偽狂犬病毒gE 抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯免疫法）
英文名稱：Swine Pseudorabies Virus gE Antibody Test Kit （ELISA）, gE Ab
【包裝規格】
96×2 測試/盒
【預期用途】
本試劑盒用于定性測定豬血清中偽狂犬病毒gE 蛋白的IgG 抗體。用于區別臨床野毒感染產生的抗體和
用gE 基因缺失疫苗免疫產生的抗體、感染豬的血清學診斷以及豬偽狂犬病毒病的流行病學調查。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的gE 蛋白的微孔反應板、辣根
過氧化物酶標記的抗豬IgG 及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的gE-IgG 結合，再與酶
標抗豬IgG 抗體形成“包被抗原+gE-IgG+酶標抗豬IgG 抗體”復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。
顯色深淺與gE-IgG 的量成正比，當顯色超過設定的臨介值時結果判為陽性，表明豬有自然感染。
【主要組成成份】
1． gE 抗原包被板96T×2 塊包被有gE 蛋白抗原
2． 酶標記物（黃蓋） 22ml×1 瓶含辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG 抗體
3． 樣本稀釋液（透明蓋） 25ml×1 瓶主要成份為0.01M PBS 緩沖液
4． 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） 50ml×1 瓶PBST 緩沖液，用前用去離子水20 倍稀釋
5． gE-IgG 陰性對照血清（綠蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陰性血清
6． gE-IgG 陽性對照血清（紅蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陽性血清
7． 顯色劑A（紫蓋） 12ml×1 瓶主要成份為過氧化脲
8． 顯色劑B（黃蓋） 12ml×1 瓶主要成份為TMB
9． 終止液（藍蓋） 12ml×1 瓶主要成份為H2SO4
10． 蓋板膜6 張
11． 說明書1 份
不同批號的試劑組份不可混用。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6 個月。
【適用儀器】
1．酶標儀，單波長450nm 測量或雙波長450/630nm 測量。
2．ELISA 用洗板機。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長期應在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。
3．樣本中含有常規用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。
【檢驗方法】
1．加樣：根據樣本數量，取所需板條。單波長檢測時，需設空白對照1 孔（不加任何液體）；雙波長檢測
時，不設空白對照孔。設陰、陽性對照各2 孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μl 于相
應孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl 樣本稀釋液，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會有
變化）。
2．溫育：加好樣后振蕩10 秒，充分混勻，置37℃溫育30 分鐘。
3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20 倍稀釋）注滿反應板孔，洗滌5 次，每
次停留1 分鐘，最后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標記物100μl，注意：空白孔不加酶標記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置37℃溫育30 分鐘。
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B 各50μl，振蕩混勻，37℃避光反應15分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10 秒，充分混勻。終止后5～30 分鐘內讀數。
9．讀數：單波長檢測時，酶標儀檢測波長為450nm，以空白孔調零，讀取各孔吸光度值（A 值）；雙波長
檢測時，以450nm 為主波長、630nm 為參比波長，讀取各孔吸光度值（A 值）。注意：單波長檢
測時，若酶標儀讀數前沒有以空白孔調零，則所得的結果均應減去空白孔A 值再做計算和判定。
10．結果判定：
臨界值（CO.）= 0.15。
樣本A 值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為gE-IgG 陽性； S/CO.＜1，判定為gE-IgG 陰性。
陰性對照血清A 值應小于0.10，陽性對照血清A 值應大于0.70，否則試驗不成立，需重新試驗。注意：
單波長檢測時，若酶標儀讀數前沒有以空白孔調零，則陰陽性對照血清A 值均應減去空白孔A 值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未自然感染豬偽狂犬病毒的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。
【檢驗結果的解釋】
1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導致假陽性。
2．陽性結果用于感染豬的血清學診斷以及流行病學調查時需結合其他方法和臨床資料進行。
【產品性能指標】
1．特異性以本品檢測30 份陰性參比血清不出假陽性。
2．敏感性以本品檢測30 份陽性參比血清不出現陰性。
3．精密性用精密性參比品測定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩定性試劑盒在2℃～8℃放置6 個月或37℃放置3 天，檢定結果達到以上1-3 標準。
【注意事項】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，操作時需戴手套穿工作衣。
3．實驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30 分鐘，或用5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理30 分鐘后廢棄。
4．微孔板從冷藏環境中取出時應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的
鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光
保存。
5．若20 倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正�，F象，放置37℃至溶解后即可。
6．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經常校對其準確性。
7．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。