標題基因組DNA純化原理

基因組DNA的純化一般是通過裂解液處理樣品，裂解細胞，將DNA從細胞核中釋放出來，并使gDNA與蛋白質分開，DNA仍留在上清液中，通過后續的異丙醇沉淀將DNA沉淀分離出來。

1、樣品的收集和保存

請盡量使用新鮮的組織材料，采集樣品如果不馬上用于提取實驗，請置于-20℃或者-70℃以下存放。期間應避免反復凍融，使用反復凍融或長時間未低溫冷藏的樣品進行DNA的提取，所提取的DNA片段可能不完整，或收獲量低。對于較難破碎細胞壁的細菌和酵母細胞，應盡量收集處于生長對數期的菌體，以取得最佳實驗效果。

2、樣品處理方式

樣品材料進行破碎（及勻漿）可以提高裂解效率，組織破碎后可以充分與裂解液接觸，利于裂解。不同來源的組織材料，根據組織成份的差異，樣品處理的方式也有所差異。一般來說，樣品的破碎方式，主要有液氮研磨、勻漿和蛋白酶K消化。

·細菌及酵母：細菌需要加入溶菌酶（Lysozyme）破碎細胞；酵母細胞需要加入溶壁酶（Lyticase）破碎細胞壁。

·動物組織：一般需要加入蛋白酶K消化的組織，無需液氮研磨、勻漿，盡量剪碎即可（如老鼠尾巴，加入蛋白酶K消化1-4小時即可）。充分破碎可以減少裂解時間，可使用玻璃勻漿器。

·植物組織：必須液氮研磨破碎。

3、DNA的洗脫

在低鹽的條件下DNA可以很容易的從硅膠膜上洗脫下來，洗脫液的采用低鹽緩沖液（10mM Tris –HCL，pH8.5）。洗脫液pH值在7.0~8.5之間時，洗脫效率最大，如果用ddH2O進行洗脫，請保證pH值在此范圍內。

注：將洗脫緩沖液65℃預熱，進行洗脫，將會提高洗脫效率。

4、DNA檢測

純化到的基因組DNA，OD260/OD280一般會在1.7~1.9之間，電泳檢測時，電泳條帶跟上樣量以及瓊脂糖凝膠濃度有很大關系，純化到基因組DNA理想狀態下為單一條帶，但是往往由于提取過程中，操作等原因，電泳顯示略有拖尾，屬于正�，F象。

5、DNA保存和穩定性

DNA分子在堿性條件下可以穩定存在，試劑盒所用洗脫液pH為8.5的緩沖液，可以穩定保存DNA分子。實驗室所用ddH2O其pH值往往小于7.0，長時間保存，DNA容易發生降解。

長期保存時，應置于-20℃或-80℃，并且避免反復凍融。