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              標題轉移因子的制備及檢定

                 

              提供者:上海繼錦化學科技有限公司    發布時間:2012/3/21   閱讀次數:456次 >>進入該公司展臺
              (一) 原理轉移因子(TF)是一種可溶性不耐熱的小分子多核苷酸肽,分子量約3 500~5 000。56℃30min可滅活,低溫保存數年活性不消失。由于轉移因子能將供體某種特定的細胞免疫功能,特異地傳遞給受體,即具有傳遞特異性細胞免疫的作用,所以稱為轉移因子。另外它還能非特異地增強一般細胞免疫作用。轉移因子的作用發生迅速,給受體注射后數小時即出現皮試陽性反應。維持時間也較長,可達數月至一年以上。轉移因子具有免疫特異性,能特異地轉移供體的遲發型超敏反應,這種免疫轉移無種屬特異性,能在種間交叉轉移。由于轉移因子是小分子成分,無抗原性,長期應用,機體也不產生抗體。在實際工作中多采用動物的脾、淋巴結或外周血白細胞制備轉移因子。
               
              (二) 材料和方法
              1 材料主要包括高速組織搗碎機、低溫冰柜、離心機、透析袋、紫外分光光度計及E玫瑰花環試驗所用器材等。
              2 方法主要有超濾法及透析法,大批量生產多用超濾法,小量制備可用透析法。下面僅介紹透析法。
              (1) 制備勻漿:將凍存的豬(人)脾臟或淋巴結取出融化,摘除脂肪及結締組織,充分洗凈。用絞肉機絞碎,加適量生理鹽水后,用高速組織搗碎機高速勻漿2次,每次1min。將勻漿置-20℃凍結。
              (2) 透析含量測定及凍干:將上述勻漿取出融化,以3 000r/min離心30m
              in,取上清,將上清置透析袋內,用無熱原的冷生理鹽水在0~4℃環境下透析過夜,袋外透析液即為制備的轉移因子。取袋外透析液測核糖含量及吸收度,按測定結果進行分裝并凍干。
               
              (三) 檢定
              1 鑒別
              ①取本品1支,加水溶解,按分光光度法測定,在251±1nm處有最大吸收度;260nm與280nm波長處吸收度比值應≥20;②取本品1支,加水溶解。取2ml加入適量茚三酮溶液,加熱后應呈紫色。
              2 酸堿度取本品10支,加水溶解,在酸度計上精密測定pH值,應為6~8。
              3 蛋白質取本品1支,加水溶解,加入磺基水楊酸試液適量,混勻不得出現混濁。
              4 水分按碘硫溶液法測定,不得超過3%。
              5 安全試驗取本品適量,加水溶解,小鼠尾靜脈注射適量,48h內不得有死亡。
              6 熱原取本品1支,加水溶解依法檢查,應符合規定。
              7 菌檢取本品3支,用無菌鹽水溶解,分別接種到檢查需氧菌、厭氧菌及霉菌用培養基上,37℃培養1周,應無菌生長。
              8 核糖以標準D核糖為標準品,取本品3支分別測定,每支含核糖均不得低于60μg。
              9 吸收度取本品5支,加水溶解,用分光光度法進行測定,其吸收值應為055左右。
              10 超敏反應取健康無傷豚鼠6只,每只腹腔注射本品適量,連續3次,于20日后再自耳靜脈注入本品適量,應無超敏反應現象發生。
              11 乙肝抗原及抗體測定取本品1支,加水溶解,以放免法測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAg、HBcAb,應為陰性。
              12 活性采用E玫瑰花環試驗。對照管中加入淋巴細胞及綿羊紅細胞,試驗管中加入淋巴細胞、綿羊紅細胞及適量本品。試驗管E玫瑰花環率應較對照管高20%以上。
               
              (四) 注意事項
              1 所用臟器應新鮮,勻漿時應徹底搗碎。
              2 各步所用蒸餾水均無熱原。
              3 轉移因子常溫下易喪失活性,因此,有關操作(如透析)應在低溫下進行。常溫下的各種操作均應快捷迅速。

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