標題免疫瓊脂雙向擴散實驗

可溶性抗原與相應抗體持異性結合，兩者比例適當并有電解質存在及一定的溫度條件下，經一定的時間，可形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應 （precipitation ） 。沉淀反應的抗原可以是多糖、蛋白質、類脂等。與相應的抗體相比，抗原分子小 （ ＜ 20pm） ，單位體積中所含抗原量多，具有較大的反應面積。為了使抗原抗體之間比例適合，不使抗原過剩，故一般均應稀釋抗原，并以抗原最高稀釋度仍能與抗體出現沉淀反應為該抗體的沉淀反應效價 （ 滴度 ） 。
　　瓊脂擴散（ agar diffusion ）為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現的一種沉淀反應。當對應的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇，且二者比例適當時，便出現可見的白色沉淀線，這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復合物。當瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時，便各自依其擴散速度的差異，再適當的部位形成獨立的沉淀線。因此，瓊脂擴散不僅用于疾病的診斷，更廣泛地用于抗原成分的分析。

　　免疫瓊脂雙向擴散是將可溶性抗原和抗體分別加到瓊脂板上相應的小孔中，兩者各自向四周擴散，如抗原與抗體相對應，兩者相遇即發生待異性結合，并在比例適合處形成白色沉淀線  。如果所加抗原和抗體標本中分別含有若干與血清學反應無關的抗原抗體，則因各種抗原的擴散系數和各對抗原抗體間的最適比例不同，以及抗原抗體復合物所形成的沉淀線具有選擇性滲透屏障作用，擴散后可以形成若干條沉淀線， — 條沉淀線代表一對抗原抗體。因此，通過雙向免疫擴散試驗，用已知抗體 （ 或抗原 ） 檢測未知抗原 （ 或抗體 ） ，可鑒定抗原性物質或免疫血清的濃度、純度及比較抗原之間的異同點。

【材料】

　1． 1 ％生理鹽水瓊脂。

　2．人血清（ 1 ： 20 ），兔抗人 IgG 。

　3．載玻片、瓊脂板打孔器、微量加樣器等。

　【方法】

　1．瓊脂板的制備：將載玻片置于水平桌面上，取已溶化的鹽水瓊脂 4ml ，傾注于載玻片上，使其自然流成水平面。待瓊脂凝固后，用打孔器按圖 6-2 打孔，孔徑 3mm ，孔距距 15mm 。

　2．加樣： 于中央孔加入人血清，周圍 1-5 孔加入不同濃度的兔抗人 IgG ， 6 孔加入生理鹽水作對照。

　3．擴散 將瓊脂板放入濕盒內置 37c 溫箱中 24 小時后取出觀察結果。

　【結果觀察】

　　觀察孔間沉淀線的數目及特征。本試驗 1 至 5 孔（ 1 ： 2 、 1 ： 4 、 1 ： 8 、 1 ： 16 和 1 ： 32 的人抗兔 IgG ）與中央孔 （ 人血清 ） 之間可出現清晰的乳白色沉淀線沉淀線。沉淀線與中央孔的距離隨抗原的濃度減小而增大。

【注意事項】

　1. 加樣時不要將瓊脂劃破，以免影響沉淀線的形成。

　2. 反應時間要適宜，時間過長，沉淀線可解離而導致假陰性、不出現或不清楚。

　3 ．加樣時不同濃度抗體和抗原不要混淆，影響試驗結果。

　4 ．試驗前應做預試驗，確定抗體的稀釋度。