標題全血細胞培養染色體技術常用試劑配制

一、國內實驗室應用試劑配制

（一）培養液

（1）RPMI1640培養液：稱取RPMI培養基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調節 pH7.2～7.4無菌過濾凍存備用。

（2）小牛血清商品：成都生物制品廠。

（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重慶藥檢所）。

（4）pH調整液：5% NaHCO3溶液高壓滅菌（8磅15min），0.1N稀鹽酸液100ml。

（5）秋水仙素：10mg/ml無菌過濾高壓滅菌（8磅10min）。

（6）磷酸緩沖液：pH7.4。

磷酸氫二鈉28.8g（H2O）、磷酸二氫鉀2.67g（無水），溶于1000ml雙蒸水中，加肝素，終濃度為100u/ml。

（7）Giemsa染色液：

Giemsa粉劑　　　　　　　　　　　1g

甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml

在研缽中，加入少量甘油油仔細研磨然后放甘油全部加磨，60℃溫箱中保溫2h，冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍，隨配隨用。

（二）固定液

（1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

（2）PBS緩沖液配制：

NaCl　　 16g　　 Na2HPO4（12H2O） 　　5.65g

KCl　　　0.4g 　KH2PO4　　　　　　　　0.4g

加雙蒸水至1000ml pH7.0。

取5%胰酶（生理鹽水配制）1ml加入50ml PBS液中（最終濃度為0.025%），4℃冰箱待用。

二、細胞培養（Bhatl B和McGee JOD,1990）

1．完全培養基

RPMI　　　　　　　　　　　　 76.0ml

胎牛血清 　　　　　　　　　　20.0ml

植物凝集素　　　　　　　　　 2.0ml

抗生素/抗菌素溶液（100