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組織細胞甘油含量試劑盒說明書下載
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文件大�。�23kb
上傳時間：2017/9/5 10:31:06
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上 傳 者：齊一生物科技（上海）有限公司
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組織細胞甘油含量酶法測定試劑盒
描述：甘油是甘油三酯的水解產物。與游離脂肪酸
一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指
標，但檢測更加方便。本試劑盒采用優化步驟，能
夠檢測實體組織、細胞中的甘油含量，線性范圍為
10-1200µmol/L。
原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-
磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化
氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞
胺，其光密度值與甘油濃度成正比。
適用范圍：測定實體組織、細胞中的甘油濃度。
組成 (105次微板測定或30 次 1 ml比色杯測定)：
(1) 裂解液 50 ml
(2) R1試劑 16 ml
(3) R2試劑 4 ml
(4) 4 mmol/L甘油標準品1 ml
4 ºC，儲存3月。
所需設備：酶標儀、生化分析儀或 721、722型可
見光分光光度計。*佳工作波長 550nm，如無此波
長建議優先選用 570nm、次選 530、490nm。
一 組織細胞裂解
細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解：
消化、離心收集細胞�；蛑苯釉谂囵B皿內裂解。
通常6孔板單孔約2x106
個細胞， 75cm2
瓶約1x107
細胞。按比例每1~2 x 106
細胞加0.1ml裂解液，
混勻，靜置10分鐘。
動物組織裂解：
切記要預先將新鮮組織剪切稱重后再進行保存。
組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產生
嚴重的測量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊
后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織重
量(約 100mg)。強烈建議按比例每 1mg 組織加
10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而
產生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多
可保證有效的裂解與脂質提�。�。用電動高速勻漿
器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方
法，因其不能完全和均勻破碎。應根據預實驗調
整初始的組織細胞加入量），而后，靜置10分鐘。
二. 裂解液處理：
1. 取適量上清液轉移到1.5ml離心管中， 進行步驟
2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量
試劑盒(#P1511)進行蛋白定量或－20ºC 儲存。
2. 70ºC 加熱10 分鐘滅活脂肪酶，可能出現絮狀沉
淀。
3. 室溫 5000rpm 離心 5 分鐘，上層清液即可用于
酶學測定。
三 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與
1 ml試劑R2混合即可， 立即使用或4ºC保存<1天，
變色棄去。 （注意：謹防來源不明但容易發生的甘
油污染，可來自操作者本人或標準品液體微粒濺射
等。）
四 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩
沖液一致的液體，將4 mM 甘油標準品倍比稀釋為
1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125
µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設置0 濃度
對照反應管。
五 甘油測定
1. 參見下表加樣。待測樣品體積 10µl，多加可能
會抑制反應。
2. 37ºC 或 25ºC 反應 10 分鐘。反應平衡后顏色在
60分鐘內穩定。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各
管OD值。
4. 繪制標準曲線并計算甘油濃度。
附Excel作圖步驟：各標準管OD 值為 y軸，標
準品濃度為 x 軸。(1)鼠標左鍵圈住數據，點擊
做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠
標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點
擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R2
值-。
5. 以每mg 蛋白濃度或細胞數校正甘油含量。
加樣表
96孔微板測定 1 ml比色杯測定
空白管
標準品
樣品 空白管
標準品
樣品
蒸餾水µl 10 35
標準品µl 10 35
樣品µl 10 35
工作液µl 190 190 190 665 665 665
說明：
1. 維生素C>0.18g/L、 血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、
二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2. 紅細胞糖酵解時合成磷酸甘油影響測定。
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