標題ELISA操作步驟

大鼠干擾素-r（IFN-r）定量EIA試劑盒使用說明

原理
本實驗采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的IFN-r與單抗結合，高靈敏檢測樣品中IFN-r的含量。
試劑盒組成
1. 48孔微孔板： 一塊
2. 樣品稀釋液：一瓶 6ml
3. 第一抗體工作液：一瓶 4ml
4. 酶標抗體工作液： 一瓶 6ml
5. 終止液：一瓶 6ml
6. 洗滌液（25 x）：一瓶 25ml
7. 標準品：一管/二管 用前加樣品稀釋液250ul溶解，溶解后4度可保存一周
8. 底物液A：一瓶 6ml
9. 底物液B：一瓶 6ml
10. 坐標紙： 一張
11. 封板紙 一張
準備試劑與收集血樣
1. 洗滌液：用重蒸水1:25稀釋
2. 收集血液標本：采集血清盡早檢測，2-8oC保存一天；需更長時間須冷凍（-20 oC）保存，避免反復凍融。
檢測程序
1. 建立標準曲線：設標準孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，第一孔加標準品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復作對倍稀釋至第六孔，最后，從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對照，第八孔為零孔。
2. 加樣：待測品孔每孔各加入待測樣品100ul混勻。
3. 將反應板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
5. 每孔（除零孔）加第一抗體工作液50ul，置37℃ 60分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔（除零孔）加酶標抗體工作液100ul（兩滴），將反應板置37 oC 60分鐘。
8. 洗板：同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反應15分鐘。
10. 每孔加入1滴終止液混勻。
11. 在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除零孔值后再行計算。
2. 以標準品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0 pg/ml之OD值在雙對數紙上作圖，畫出標準曲線。通過標本的OD值可以在標準曲線上查出其濃度�；蚴褂糜嬎銠C軟件，繪制出標準曲線，計算樣品含量。
注意事項
1. 以上標準孔及待查樣品均建議做復孔，每次測定應同時制作標準曲線。
2. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。有效期6個月。
3. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應輕輕搖勻后使用。
4. 本試劑盒含2M硫酸，不要將它與含疊氮化鈉的廢物混在一起。
5. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
6. 本試劑盒僅供研究用。