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              標題競爭ELISA的基本程序

                 

              提供者:上海篤瑪生物科技有限公司    發布時間:2024/6/7   閱讀次數:91次 >>進入該公司展臺
                競爭ELISA
              此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為:
              ① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干
              ② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
              ③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液
              ④ 用ELISA檢測儀測定OD值。
              被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定,如果待檢溶液中抗原越多,被結合的標記抗原的量就越少,有色產物就減少,這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記,而且因為抗原的結構不同,還需應用不同的結合方法。此外,試驗中應用酶標抗原的量較多。
              阻斷ELISA
              本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬。≒R)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:
              ① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干
              ② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
              ③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
              ④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干
              ⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
              ⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液
              ⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。
              本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。
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              ① 用抗u鏈(抗IgM重鏈)抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜,洗滌三次、拋干
              ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干
              ③ 加酶標抗原 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
              ④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液
              ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

              關鍵詞:穩定性強  特異性強  靈敏度高  免費代測  

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