標題兔基質金屬蛋白酶原1(Pro-MMP-1)ELISA試劑盒

使用說明書

試劑盒采用雙一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被白蛋白（ALB）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

點ELISA：與常規的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特不夠高等。該的主要操作程序為：⑴載體膜的預處理及抗原包被　取纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使纖維素膜干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封閉　將纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被檢　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶標，37℃反應一定時間后，用洗滌液洗三次。⑸顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應一定時間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應。⑹ 結果判定　以陽性、陰險作為對照，膜片出現深棕紅色點者為陽性反應，否則為陰性反應。

樣品收集、處理及保存

2.  ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

1. 酶標儀（450nm）

3. 37℃恒溫箱

本試劑盒采用雙夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被捕獲的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經過溫育并洗滌。

兔基質金屬蛋白酶原1(Pro-MMP-1)ELISA試劑盒 29

操作注意事項

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

試劑的

洗板

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

5.  棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

實驗原理：試劑盒采用雙一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕獲的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒性能

2.  靈敏度檢測濃度小于1.0 mg/mL。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

6.  有效期：6個月

免責聲明

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。