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雞蛋白相關蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)ELISA試劑盒
酶聯吸附法(ELISA)在多個行業都有應用,特別是在醫學和生物技術域中了廣泛應用。以下是一些應用ELISA的行業:1.醫學診斷:ELISA被廣泛應用于各種和等的診斷,如、、結核病等。在動物檢疫方面,ELISA已為廣泛采用的,例如用于診斷豬傳染性胃腸炎、牛副結核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽、藍舌病等。2.生物技術研發:ELISA可以用于檢測生物分子,如蛋白質、多肽、等,在生物醫學研究域廣泛應用。例如,在研發中,ELISA可以用于檢測的生物活性、與靶點的結合情況等。3.食品安全檢測:ELISA可以用于檢測食品中的有害,如殘留、獸藥殘留等,保障食品安全。4.監測:ELISA可以用于評估水質、空氣等指標,監測狀況?傊,酶聯吸附法在醫學、生物技術、食品安全和監測等域都有廣泛的應用價值。
ELISA試劑盒用法
試劑盒操作步驟:
實驗開始,請提配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.加樣:分別設空白孔、孔、待測樣品孔?瞻卓准訕悠废♂屢100μl,余孔分別加品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為實驗結果有效性,每次實驗請使用新的品溶液。
2.棄去,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記工作液 100μl(取1μl生物素標記加99μl生物素標記稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用小時內配制),37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后,棄去孔內,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5.溫育60分鐘后,棄去孔內,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時可見品的3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
雞蛋白相關蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)ELISA試劑盒
ELISA試劑盒基于抗原之間的特異結合反應,以用于測定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動物后的多克隆和使用雜交瘤技術的單克隆,而抗原或的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成制備。ELISA試劑盒的作用ELISA試劑盒是一種用于體外定性檢測人或中的特定的試劑盒,例如抗人類戊型(HEV)IgMELISA檢劑盒。ELISA試劑盒具有靈敏度高、特好、操作簡便、安全、快速等優點,可以用于檢測類因子、、等,在臨床診斷、科研和生物制品檢測等域具有廣泛的應用。
標本的采集及保存:
:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
細胞物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 (注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。)
標本的稀釋原則:通過文獻檢索的了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為濃度0 pg/ml,臨用15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記的稀釋原則:臨用以生物素標記稀釋液稀釋,稀釋根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記加990μl生物素標記稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:臨用以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用小時內配制
注意事項:
1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。
2.洗滌非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3.一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,建議使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做曲線,做復孔。
5.如標本中待測含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請乘以稀釋倍數。
6.在配制品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
7.底物請避光保存。
8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
試劑盒性能
1.準確性:品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。
2.靈敏度檢測濃度小于10 pg/ml。
3.特:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.重復性:批內與批見應分別小于9%和15%。
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