標題人鈣依賴性蛋白激酶II劑2(CAMK2N2)ELISA試劑盒

人鈣依賴性蛋白激酶II劑2(CAMK2N2)ELISA試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被白蛋白（ALB）的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的白蛋白（ALB）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

點ELISA：與常規的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特不夠高等。該的主要操作程序為：⑴載體膜的預處理及抗原包被　取纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使纖維素膜干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封閉　將纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被檢　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶標，37℃反應一定時間后，用洗滌液洗三次。⑸顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應一定時間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應。⑹ 結果判定　以陽性、陰險作為對照，膜片出現深棕紅色點者為陽性反應，否則為陰性反應。

試劑盒組成：自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱

樣品收集、處理及保存

1.  ：使用不含熱原和內的試管，操作中避免任何細胞，收集血液后，3000轉離心10分鐘將和紅細胞迅速小心地分離。

2.  ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

本試劑盒采用雙夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被捕獲的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經過溫育并洗滌。

人鈣依賴性蛋白激酶II劑2(CAMK2N2)ELISA試劑盒

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正�，F象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，終結果乘以5才是樣本實際濃度。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有組分使用充分搖勻。

試劑盒組成

注：品（S0-S5）濃度依次為：0、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL

試劑的

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板

1.  手工洗板：甩盡孔內，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置品孔和樣本孔，品孔各加不同濃度的品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

布ELISA：（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型檢測技術。該是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為反應提供較大的表面積，反應的性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優點。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例，C－ELISA的主要程序為：⑴ 把抗布氏桿菌的包被（吸附）在聚脂布上，并經洗滌及封閉；⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；⑶ 加酶標記的抗布氏桿菌，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；⑷ 加入底物液顯色；⑸ 測定OD值。

試劑盒性能

1.  準確性：品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度檢測濃度小于1.0 mg/mL。

3.  特：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。