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              標題人前體因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA試劑盒

                 

              提供者:上海篤瑪生物科技有限公司    發布時間:2024/1/5   閱讀次數:16次 >>進入該公司展臺
               人體因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA試劑盒

              間接ELISA:本法主要用于檢測。(DVH)的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;② DVH包被抗原、酶標抗、陰性及陽性DVH參考;待檢鴨;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚微量板。⑵ 步驟① 加抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干③ 加酶標 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘,加終止液⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值,并計算出P/N比值。⑶ 結果判定 已知陽性與已知陰性的比值(P/N)≥2.1,而且已知陽性的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下,如果待檢與已知陰性的比值(P/N)≥2.1,而且待檢的OD值≥0.4,則判為陽性,否則判為陰性。

              ELISA (Enzyme-Linkedimmunosorbent assay)的基礎是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。這一的基本原理是:①使抗原或結合到某種固相載體表面,并保持其活性。②使抗原或與某種酶連接成酶標抗原或,這種酶標抗原或既保留其活性,又保留酶的活力。在測定時,把待測樣本(測定其中的或抗原)和酶標抗原或按不同的步驟與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復合物與其他分開結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢的量直接相關,所以可根據顏色反應的深淺定性或定量分析。由于酶的催化速率很高,所以可地放大反應效果,從而使測定達到很高的度。

              本試劑盒采用雙夾心法酶聯吸附試驗(ELISA)。往預先包被捕獲的包被微孔中,依次加入標本、品、HRP標記的檢測,經過溫育并洗滌。

              人體因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA試劑盒

              ELISA (Enzyme-Linkedimmunosorbent assay)的基礎是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。這一的基本原理是:①使抗原或結合到某種固相載體表面,并保持其活性。②使抗原或與某種酶連接成酶標抗原或,這種酶標抗原或既保留其活性,又保留酶的活力。在測定時,把待測樣本(測定其中的或抗原)和酶標抗原或按不同的步驟與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復合物與其他分開結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢的量直接相關,所以可根據顏色反應的深淺定性或定量分析。由于酶的催化速率很高,所以可地放大反應效果,從而使測定達到很高的度。

              實驗原理:試劑盒采用雙一步夾心法酶聯吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕獲的包被微孔中,依次加入標本、品、HRP標記的檢測,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

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              標記:良好的酶結合物取決于兩個條件:即價的和高活性的酶。的活性和純度對制備標記至關重要,因為特反應隨活性和純度的而增強。在酶標記中,的活性有所,故需要純度高、效及抗原親和力強的球蛋白使用親和層析提純的,可性,而且可稀釋使用,非特吸附。

              操作步驟:1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。2. 設置品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;品孔各加不同濃度的品 50μL;3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL;4. 隨后品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測 50μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。5. 棄去,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗 板 5 次(也可用洗板機洗板)。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入終止液 50μL,15min 內,在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

               

               

               

               

               

               

              關鍵詞:ELISA試劑盒  靈敏度高  特異性強  重復性好  

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