標題論遠慕生物感受態的制備及注意事項

   感受態是指一種容易接受外源DNA的狀態。在轉基因的過程中，一般會把待轉化的宿主細胞處理成為感受態，以提高轉化的效率。受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學試劑法）的處理后，細胞膜的通透性發生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態細胞。

DH5a菌感受態的制備：

1、從LB平板上挑取DH5a單菌落,接種于3LB液體培養基中 37℃下振蕩培養12h左右直至對數生長后期培養基中。

2、將菌懸液以1:100的比例接種于LB液體培養基中,37℃振蕩培養過夜，再將菌懸液以1:100的比例接種于100ml LB液體培養基中37℃，210rpm至OD ＝0.5左右(生長對數期），約2-3h。

3、將菌液轉移到兩只預冷的50ml無菌離心管中，冰浴30min，4℃、5000rpm離心5min，棄上清。

4、每只離心管中加入4ml冰冷的0.1M CaCl2，使菌體重懸，冰浴30min，4℃、5000rpm離心5min，棄上清。

5、每只離心管中加入1ml冰冷的0.1M CaCl2，重懸后分裝到無菌的1.5ml離心管中(每管100µl)。

6、置-40℃冰箱長期保存。

制備感受態的注意事項：

1、所有器具必須清潔干凈，避免污染。

2、培養基裝量建議不要高于培養基體積/三角瓶容量=100ml/500ml，50ml/250ml，厭氧生長出來的菌體是做不出效率高的感受態的。 

3、接種前的pH值在6.8-7.2。等菌搖好后，可以測一下pH值，不要低于6.0，最好在6.5以上。

4、經驗證明，當培養基中存在一定量的Mg2+離子時，該方法制得的感受態要相對較高。在制備普通感受時，使用20mM MgCl2做為培養基的添加物，在感受態收獲之前20-30分鐘加入，會收到很好的效果。

5、較低的溫度培養有利于感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了Inoue的高效感受態制備方法。

6、在保存感受態時，DMSO要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。

7、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然后保存于超低溫冰箱內。

8、凍存的感受態用一次拿一管，不要反復凍融�；瘍鲋�后立即使用，不要冰上放太久。

9、操作時可以輕彈輕甩，盡量避免用移液器吹吸。