標題血清標志物篩查中必須注意的問題

提供者：上海遠慕生物科技有限公司發布時間：2019/9/9 閱讀次數：310次 >>進入該公司展臺

十月的風吹著十月的雨，在那樣的一個日子里，總是會有那么多美好的相遇。在那樣的一場邂逅里。在滿心歡喜后就是一段不可痊愈的傷疤，在雨的幽咽里。美好的十月，滬鼎生物告訴您血清感染性疾病標志物篩檢中應重視的問題，了解它對您有益無害哦。
首先，血液篩查質量的高低，直接關系到受血者的安全。目前。國內采供血機構針對感染性疾病病原體篩檢的標志物共有4種，即乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型地炎病毒抗體(抗HCV)、人免疫缺陷病毒抗體(抗HIV)和梅毒抗體。主要采用酶聯免疫明附試驗(ELISA)方法檢測。方法模式有一步雙抗體夾心法、間接法和一步或兩步雙抗原夾心法等。所使用的儀器設備主要有酶標洗板機、全自動酶免疫分析系統和全自動加樣系統等。盡管國內采血機構的血液篩查檢測質量在不斷提高，但在不同層次的采血機構，仍不同程度的存在一些時常困擾基層實驗室工作人員的的問題。
一、 ELISA測定的"灰區"問題
血液篩查中的ELISA測定是一種定性測定，必須在"陽性"與"陰性"之間有一條明確的分界線，也就是所謂的"陽性判斷值"(Cut-off)，這是定性免疫測定結果的報告的依據，在定性免疫測定中，確定合適的陽性判斷值對減少假陰性具有重要意義。而陽性判斷值的上移可下移，可導致假慢性或假陰性結果的出現。通常陽性判斷值，是將大量陰性和陽性的測定數據進行統計分析后確定的。其確定依據為測定的"灰區"。"灰區"的大小可用統計學方法確定。測定結果處于"灰區"的樣本，可通過確認試驗或追蹤檢測來確定到底是陽性還是陰性，這一點對于臨床病人標本的檢測不是什么問題，但在血站篩檢獻血員及正常人群體檢時，就必須對這個問題加以注意。對于測定吸光度值(A)低于但接近Cut-off值的血液是否可輸給受血者，ELISA"灰區"到底有多太?這一點常使血站工作人員感到困惑。因此，用于血液篩查檢測的ELISA試劑盒有必要確定一個"灰區"的下限。盡管這樣可能會導致一些正常血液的廢棄，但對于保證輸血安全極有意義。
二、"鉤狀效應"(Hook effect)問題
"鉤狀效應"系指在一步法ELISA中，測定顯色隨著待測標本中抗析或濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度即隨抗原或抗體濃度的增加而開始下降直到不顯色，而出現假陰性結果的問題。在免疫沉淀試驗中又稱為"帶現象"(Zone phenomenon)。在血液篩查中，有中能因"鉤狀效應"的存在而出現假陰性的主要是HBsAg和抗HIV的檢測。目前，國內HBsAg的檢測均為一步雙抗體夾心法，抗HIV有一些采用了雙坑原夾心法，盡管試劑行產廠家在固相和標記抗體或抗原的選擇匹配上，采取了結合位點遠離或含多個可結合位點的方法，在很大程度上，可以避免或減輕"鉤狀效應"，但如果某一批試劑處理不好或是特定的標本，仍有可能出現由"鉤狀效應"所致的假陰性，解決"鉤狀效應"的zui好辦法，就量采用兩步法試劑盒，其次就是對每一批試劑盒使用前，采用能得到的強陽性的標本，進行有關"鉤狀效應"的質檢。
三、病毒變異的所致的假陰性問題
病毒變異所致的假陰性主要表現在HBsAg的檢測。HBV的S基因負責編碼表達表面抗原，即S蛋白，任何影響S蛋白表達水平或其抗原性的突變，都可能導致表面抗原檢測出現陰性結果[5-9]。特別是負責編碼表面抗原"a"決定簇的序列發生改變，表面抗原"a"決定簇是主要抗原決定簇，為各亞型所共有，位于高度保守的表面抗原第124~127位氨基酸的新水區，此區富含半胱氨酸并借位于第124、137、139和147位間的二硫鍵形成雙環結構，從而維持表面抗原的抗原性，所以，此區哪怕僅1個氨基酸發生突變，也會影響表面抗原的抗原性，使其抗原性發生改變，或者表達下調節器，甚至不表達。從而使得常規試劑檢測為HBsAg陰性，由此可見，HBsAg檢測陰性的血液中，仍可能有一定比例鐵HBV感染血液。
目前，國外普遍檢測抗HBc，因HBsAg檢測陰性的HBV感染者中，單項抗HBc陽性的病人中比例是zui高的，考慮到國內的乙肝病毒感染率遠高于國外，因此，尤有必要對HBsAg檢測陰性所致的HBV輸血感染問題引起重視，并進行必要的研究探討，從而采取相應的措施，如病毒核酸檢測等，以降低經輸血傳播HBV的可能性。

關鍵詞：血清標志

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