標題細胞培養方式對低溫保存后細胞功能影響實驗

     用傳統低溫保存法保存細胞載體復合體, 可能破壞細胞和載體的黏附關系。研究報道, 細胞與細胞及細胞與載體之間的互相接觸對維持細胞的存活率至關重要, 細胞生存能力下降的主要原因是由于細胞被分離后無法黏附, 從而引起大量細胞凋亡 , 只有黏附于載體上的細胞才能繼續增殖分化以及維持肝細胞正常的代謝功能。因此, 本文將培養于微載體Cytodex與Cytopore的肝細胞進行低溫保存, 研究不同培養方式對復蘇后細胞與復合體黏附關系的影響, 探討肝細胞在微載體上的生長及肝細胞的代謝功能, 為研究細胞與微載體復合體的低溫保存機理提供有效方法。

    目前, 應用較多的是美國GE公司實體微載體Cytodex與多孔微載體Cytopore等, 這些微載體可以提供足夠大的表面積, 使細胞在其表面及內部黏附生長, 并使營養物質進入其空間。近年來, Cytodex與Cytopore系列載體常常應用于細胞的高密度培養, 取得了一些令人滿意的結果 , 但載體細胞高密度培養后如何進行復合凍存目前研究較少, 傳統研究較多的是細胞凍存。如何低溫保存細胞與載體的復合體, 是我們要解決的一個問題。

    肝細胞是貼壁性細胞, 當細胞生長達到一定數量時, 存在細胞接觸抑制效應, 阻礙細胞的繼續生長 。因此, 體外高密度培養肝細胞需要使用載體材料, 其表面供肝細胞黏附生長, 是后續細胞增殖生長、進而組織化的關鍵。

     為了研究細胞培養方式對低溫保存后細胞功能的影響, 將大鼠肝細胞接種至兩種不同微載體(實體微載體Cytodex、多孔微載體Cytopore), 微重力高密度培養后于–80 °C凍存(凍存速率是1 °C/min, 5% DMSO+0.4 mol/L山梨糖醇)。2周后復溫細胞與載體材料, 用顯微鏡觀察細胞生長形態, 計算細胞活力情況, 并通過細胞代謝功能指標葡萄糖、白蛋白、尿素等的測定, 反映細胞在兩種載體培養和低溫保存后的生長和代謝情況。結果表明, 在細胞培養期間, Cytopore的MTT 值、代謝指標值是Cytodex的1~1.5倍, 低溫保存后, Cytopore的各項指標與低溫保存前差異不顯著, 而Cytodex的代謝指標差異顯著。因此, 大鼠肝細胞在微載體Cytopore的高密度培養及低溫保存比 Cytodex更有利于細胞的生長和代謝。