標題遠慕生物簡介:基因組DNA提取方法

基因組DNA提取方法

        制備基因組DNA是進行基因結構和功能研究的重要步驟，通常要求得到的片段的長度不小于100-200kb。在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。主要是CTAB方法，其他的方法還有1物理方式:玻璃珠法,超聲波法,研磨法,凍融法。2化學方式：異硫氰酸胍法,堿裂解法3生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有:硅質材料、陰離子交換樹脂等


試驗步驟：

1、貼壁細胞用胰酶消化，離心收集。

2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。

3、加入5mlDNA提取緩沖液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混勻。

4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,

5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，氯仿，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相

6、用等體積的氯仿，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。

7、2500rpm離心10min.轉上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。

2500rpm,離心10min。棄上清。

8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉（PH5.2）與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。



 

公司主要代理產品：

 

試劑盒：ELISA試劑盒、檢測試劑盒、免疫組化試劑盒、放免試劑盒、分子生物學試劑盒、金標檢測試劑盒、Omega試劑盒、細胞凋亡試劑盒、生化試劑盒。

 

各種動物血清：內皮細胞專用血清、Hyclone、GIBCO胎牛血清。

 

抗體：進口原裝抗體、進口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、單標抗體、雙標抗體、多標抗體、一抗、二抗；免疫組化抗體、免疫熒光抗體、流式細胞抗體、免疫細胞化學抗體。

 

細胞：原裝進口細胞、腫瘤細胞、正常細胞、腫瘤耐藥細胞。

 

耗材：細胞培養耗材、普通實驗耗材。

 

生化試劑：原裝進口生化試劑、進口分裝生化試劑。