標題遠慕詳解:ELISA試劑盒的操作步驟

提供者：上海遠慕生物科技有限公司發布時間：2018/8/10 閱讀次數：246次 >>進入該公司展臺

Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。那么,ELISA試劑盒的操作步驟以及注意事項你了解多少呢?下面就有遠慕生物為您詳細講解一下吧!

操作步驟：

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50?l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40?l，然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50?l，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50?l，再加入顯色劑 B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50?l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

操作時注意事項：

1. Elisa試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔一孔OD值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5.嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

6.本試劑不同批號組分不得混用。

7.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.底物請避光保存。

關鍵詞：ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒

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