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              標題DNA提取過程中各種試劑的作用及原理

                 

              提供者:上海遠慕生物科技有限公司    發布時間:2018/8/1   閱讀次數:164次 >>進入該公司展臺
              堿裂解法原理

                  在pH 12.0 ~ 12.6堿性環境中,細菌的線性大分子量染色體DNA變性分開,而共價閉環的質粒DNA雖然變性但仍處于拓撲纏繞狀態。將pH調至中性并有高鹽存在及低溫的條件下,大部分染色體DNA、大分子量的RNA和蛋白質在去污劑SDS的作用下形成沉淀,而質粒DNA仍然為可溶狀態。通過離心,可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質,質粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯fang抽提進一步純化質粒DNA。

                  電泳檢測:質粒電泳一般有三條帶,分別為質粒的超螺旋、開環、線型三種構型

                  DNA提取過程中各種 試劑 的作用及原理

                  溶液I—溶菌液:

                  溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌體細胞壁的主要化學成分肽聚糖中的&beta;-1,4糖苷鍵,因而具有溶菌的作用。當溶液中pH小于8時,溶菌酶作用受到抑制。

                  葡萄糖:增加溶液的粘度,維持滲透壓,防止DNA受機械剪切力作用而降解。

                  EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金屬離子,抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因為溶菌酶的反應要求有較低的離子強度的環境。

                  2.溶液II-NaOH-SDS液:

                  NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是穩定的。

                  但當pH>12或pH<3時,就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。

                  在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L,加抽提液時,該系統的pH就高達12.6,因而促使染色體DNA與質粒DNA的變性。

                  SDS:SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有:

                  (1)溶解細胞膜上的脂質與蛋白,因而溶解 膜蛋白 而破壞細胞膜。

                  (2)解聚細胞中的 核蛋白 。

                  (3)SDS能與蛋白質結合成為R-O-SO3-…R+-蛋白質的復合物,使蛋白質變性而沉淀下來。但是SDS能抑制核糖 核酸酶 的作用,所以在以后的提取過程中,必須把它去除干凈,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA時)受到干擾。

              關鍵詞:DNA提取  緩沖液    

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