標題磁珠分離技術

一、原理

免疫磁珠法分離細胞基于細胞表面抗原能與連接在磁珠上的特異性單抗相結合，在外磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由于不能與相連著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。免疫磁珠法分正選法和負選法，也稱陽性分選法和陰性分選法。正選法-磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞；負選法-磁珠結合的細胞為不需要細胞。一般負選法分選較為常見，因為此方法獲得的所需要的細胞表面不含有抗體及磁珠的干擾�，F以兩步法分選小鼠CD4+ CD25+ T細胞的分選為例分別介紹負選法、正選法如下。

1、材料試劑：

<1>、生物素化的，小鼠CD4陰性分選抗體混合物[cocktail，內含抗B細胞（CD45R，B220）、CD8+T細胞（CD8a，Ly-2）、造血細胞（CD11b,Mac-1），NK細胞（CD49b,DX5）等非CD4+T細胞表面標志的抗體]。

<2>、結合有磁珠的抗生物素抗體（Scimall科學在線提供）；含0.5%BSA（或0.5%FCS）及2mmol/L EDTA的PBS緩沖液；抗小鼠CD25-PE抗體；結合有磁珠的抗PE抗體（Scimall科學在線提供）；磁珠分離器或分離柱。

<1>、負性分選小鼠CD4+T細胞

<2>、陽性分選小鼠CD25+ T細胞

二、注意事項：

1、如果分離細胞用作培養，全過程注意無菌操作。

2、磁珠分離系統分離的細胞 純度可以達到80%-99%，得率在60%-90%左右，僅次于或相當于流式細胞儀的分選效率，與FACS相比，MACS設備簡單，耗時極短，故而應用廣泛。設定不同的程序（細胞得率或純度不可兼得），連續兩次過柱分選可進一步提高分選細胞純度，通�？蛇_到95%-95%。

3、由于陽性分選得到的細胞表面結合有抗體及磁珠，有可能影響細胞的功能，故目前常用陰性分選的方法分離細胞。如果只能用陽性分離的方法，Scimall科學在線建議在分離后培養1-2天，使結合在細胞表面的抗體脫落。

4、抗體包被磁珠對死細胞、紅細胞常有非特異性結合。故而分選前去除死細胞、紅細胞（如通過Ficoll分離去除）可以提高分離的效果。

 

三、陽性分選法和陰性分選法的優缺點比較