標題人抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒操作詳細-齊一生物現貨供應

貨號：QY-H10010

英文名稱：human Resistin ELISA KIT 

類別：酶聯免疫分析檢測試劑盒

規格：96T/48T

包裝：盒

檢測原理：采用雙抗夾心法

保質期：六個月

產品保存條件：2-8°C

應用范圍：僅供科研研究實驗使用

樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細胞培養上清/其它生物液體（具體情況請咨詢）

本文由專注于提供生物科技服務的齊一生物收集整理標本的采集及保存

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存  過程 中  如有沉淀形成，應再次離心。

2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

3.尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。  檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以 使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

標本要求： 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒組成：

48孔配制：

1. 說明書: 1份

2. 封板膜:  2片（48）

3. 密封袋:  1個

4  酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)

5. 標準品:    0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7. 酶標試劑:     3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8. 樣品稀釋液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9. 顯色劑A液： 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10 .顯色劑B液：  3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11 .終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置：

1.  說明書:1份

2.  封板膜:2片（96）

3.  密封袋: 1個

4.  酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.  標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.  標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.  酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8.  樣品稀釋液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9.  顯色劑A液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10. 顯色劑B液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11. 終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

需要自備的試劑和器材

1.37℃恒溫箱。

2.標準規格酶標儀。

3.精密移液器及一次性吸頭

4.蒸餾水，

5.一次性試管

6.吸水紙

操作步驟

1、標準品的稀釋：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為9mmol/L，6 mmol/L，3 mmol/L，1.5mmol/L， 0.75 mmol/L）。

2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7、溫育：操作同3。

8、洗滌：操作同5。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

注意事項：

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

底物請避光保存。

嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

本試劑不同批號組分不得混用。

如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
具體咨詢：齊一生物銷售熱線：18121453965  QQ：741653262或咨詢在線客服,或者以郵件形式發至 qiyibio@163.com僅供科研使用.齊一生物提供技術服務和檢測服務

齊一生物科技（上海）有限公司，專業從事生物產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程技術公司！為廣大科研工作者、企業和學校提供質優價廉的實驗室用品，本公司主要經營ELISA酶聯免疫檢測試劑盒、進口原裝ELISA試劑盒、分子生物學檢測試劑盒、免疫學檢測試劑盒、各品牌原裝進口抗體抗原、細胞菌株、生物培養基、生化試劑、實驗耗材等多門類上萬余種科研試劑產品！產品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域！已迅速發展成為國內科學試劑的國際運營商之一，是國家重點實驗室指定供應商，并與國內多家科研單位緊密合作。產品已被中國科學家使用后在國際頂尖期刊<Cell>、<Nature>、<PNAS>、<Immunity>等上發表文章數