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從黃化麥子苗中提出取得總RNA,可以為cDNA文庫的構建做好準備。我們重點是要保障RNA的完整性、產率、避免修飾和純凈度,特別是完整性、避免修飾和純凈度。RNA是單鏈,2’OH是它的化學性質遠比DNA活潑。所以,提出取得RNA頗為不易。加之RNA的不均一性,要將全部的RNA(rRNA、tRNA、mRNA)絕對提出,更加有挑戰性。
而Rnase是無處不在的(這種酶遇高溫后也不會失去活性,復性容易,在胞里外都有散布,不需拿獲,不必二價金屬離子的合適);RNA還最怕DNA污染,由于若做RT-PCR,DNA的存在會降產量低物的純凈度和速率全部以上的因素都構成了我們成功提出取得RNA的絆腳石。不過我們可以無須思索問題RNA的機械剪切,由于RNA一般較小,普通不會遭受機械剪切的影響。
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