標題培養細胞的免疫酶標抗體染色法

免疫酶組織化學技術是以酶作為抗原抗體反應的標記物，酶催化相應的 底物，形成一種不溶性的反應產物。光鏡觀察時，要求形成的終產物為不溶性的有色沉淀， 而電鏡觀察時，則要求酶反應的終產物經適當處理后，具有較高的電子密度。辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）是目前應用最多的酶標記物，具有穩定性強和酶反應特異性高等優點。

1）0．1mol／LPB（pH 7．2）配制的4％多聚甲醛原位固定（4℃）1小時；
2）2％H2O2／甲醇處理（可省略），室溫20分鐘，封閉內源性過氧化物酶活性；
3）PBS漂洗后1％BSA室溫孵育15分鐘；
4）特異性抗體（第一抗體）室溫孵育3小時或4℃孵育過夜；
5）PBS充分漂洗后，HRP或生物素標記的第二抗體室溫孵育30—60分鐘，如系生物素標記的第二抗體，反應后則需進一步按ABC試劑盒要求操作；
6）PBS漂洗后，1％戊二醛0．1m01／LPB配制固定30—60分鐘，PBS漂洗；
7）呈色反應：0．03％～0．05％DAB 0．0l％H>（L／0．05mol／LTris—HCl（pH 7．6）顯色，適時終止反應，PBS漂洗；
8）1％OsO4后固定30～60分鐘；
9）樣品的脫水、原位包埋、超薄切片制作及電鏡觀察等與常規電鏡相同。

培養細胞的免疫酶標抗體染色法電鏡圖
顯示胸腺細胞表面：thy1.2抗原分布（箭頭所示）