閱讀排行榜

手寫達人

猜您喜歡

標題人P糖蛋白（P-gp）酶聯免疫分析

提供者：上海勁馬實驗設備有限公司發布時間：2012/4/10 閱讀次數：8213次 >>進入該公司展臺

人P糖蛋白（P-gp）酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T

10pg/ml-320pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中P糖蛋白（P-gp）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人P糖蛋白（P-gp）水平。用純化的人P糖蛋白（P-gp）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入P糖蛋白（P-gp），再與HRP標記的P糖蛋白（P-gp）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的P糖蛋白（P-gp）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人P糖蛋白（P-gp）濃度。

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（640pg/ml）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

320pg/ml	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
160pg/ml	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
80pg/ml	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
40pg/ml	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
20pg/ml	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

上海勁馬實驗設備有限公司（http://www.jmbiosh.com）主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的研發、銷售。并代理銷售R&D、Sigma、Amresco 、Omega、Gibco、Pharmacia、HyClone、GIBCO等多個國外知名品牌，致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供一流的科研試劑和完善的技術服務，滿足生物化學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。電話：021-60517348

關鍵詞：

上一篇：廣州空氣能，熱泵熱水器維修安裝服務中心空氣能維修經驗下一篇：冷鏈物流的溫濕度在線監測-九純健JCJ901P

該提供者的其它文獻

版權聲明

① 凡本網注明"來源：易推廣"的所有作品，版權均屬于易推廣，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用。已獲本網授權的作品，應在授權范圍內

使用，并注明"來源：易推廣"。違者本網將追究相關法律責任。

② 本信息由注冊會員：上海勁馬實驗設備有限公司發布并且負責版權等法律責任。