GE-200液相色譜儀在飼料中替米考星的含量測定應用
本標準適用于混合飼料、濃縮飼料和預混合飼料中替米考星的測定。本標準測定量限（LOQ）為每千克飼料中替米考星2mg。
GB/T 6682 分析實驗用水規則和實驗方法
儀器設備
GE-200二元高壓液相色譜儀，配梯度洗脫SCL-501系統控制器，GE-200液相色譜儀，N2010色譜工作站
色譜柱：Vertex 苯基柱4.6*250,5um
分析天平：感量0.0001g
天平：感量0.01g
振蕩器
玻璃具塞三角瓶：250ml
微孔濾膜：孔徑0.45um
試劑和溶液
水應符合GB/T 6682三級水的規定
乙腈：色譜純，磷酸：85%，二丁胺，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀
1mol/L磷酸二丁胺緩沖液（DBAP）：在700ml水中加入168ml二丁胺，然后緩慢加入約70ml磷酸，震蕩使二丁胺溶解，冷卻至室溫。調節PH至2.5-5.6（以每次1-2ml的速度加入18ml磷酸）。轉移至量瓶中，加水至1000Ml,過濾，備用。
PH6.0磷酸緩沖液：取136g磷酸二氫鉀、69g磷酸氫二鉀至900ml水中，用磷酸調節PH至6.0±0.2，轉移至量瓶中，加水至1000ml
提取液：取200ml乙腈、25mlDBAP,25ml磷酸緩沖液，加水至1000ml
流動相A：乙腈
流動相B：PH2.4-3.0的水（用磷酸調節、過濾）
流動相C：0.02ml/L DBAP溶液。取20ml 1mol/L DBAP溶液，加水至1000ml，過濾即得
替米考星標準溶液：將替米考星對照品在在60℃減壓干燥3H，稱取400mg（精確到0.0001g），置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶液、定容，配置成4000ug/ml的貯備液，避光保存。
替米考星標準中間液：準確吸取6.25ml標準貯備液于50ml棕色容量瓶中，用提取液稀釋、定容、賠償成濃度500ug/ml的標準中間液。
替米考星標準工作液：準確吸取一定量的標準中間液于棕色容量瓶中，用提取液稀釋、定容至濃度為5、20、40、60、80ug/ml的標準工作液
試樣制備
取有代表性的樣品至少500g，用四分法縮減至約200g，粉碎通過1mm孔徑篩，混勻，貯于磨口瓶中備用
分析步奏
稱取試樣2g-10g（精確至0.01g）于玻璃具塞三角瓶中，準確加入100ml提取液，振蕩器上震蕩60Min（震蕩速度200r/min）。用濾紙過濾，棄初濾液，收集部分濾液，用微孔濾膜過濾，濾液供高效液相色譜分析。
HPLC色譜條件
色譜柱：Vertex 苯基柱4.6*250,5um
檢測波長：280nm
流動相流速：1.5ml/min
進樣體積：20uL
流動相：A、B、C，梯度見下表：
時間（min） A% B% C%
0.0 50 50 0
3.0 50 50 0
4.0 15 85 0
5.0 15 0 85
25.0 25 0 75
25.1 50 50 0
30.0 50 50 0
定量測定
測定標準工作液和試樣溶液中替米考星峰面積的響應值，用單點或多點校準法定量
