標題益智藥材中圓柚酮含量的高效液相色譜法測定

目的建立益智藥材中圓柚酮的含量測定方法，并對不同產地藥材進行含量測定。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Diamonsil�睠18（5 μm，250 mm×4.6 mm），流動相為乙腈�菜�（65∶35），檢測波長為235 nm，流速為1.00 ml·min��1，柱溫為40℃。結果圓柚酮在0.115 2～0.268 8μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0.999 9；平均回收率為97.34%，RSD=1.48%（n=6）。不同產地益智藥材中圓柚酮的含量在1.50～2.10 mg·g��1之間。結論該法可靠、準確、簡便，可作為益智藥材的質量控制方法。

　　【關鍵詞】 益智； 圓柚酮

　　ChinaAbstract：ObjectiveTo establish a method for determination of the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae，and to determine the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places by this new method.MethodsThe Diamonsil�睠18（5 μm，250 mm×4.6 mm） column was used. The mobile phase was CH3CN�睭2O（65:35） ａnd the detection wavelength was set at 235 nm.The flow rate was 1.00 ml·min-1 ａnd the column temperature was 40℃. ResultsThe Nootkatone content showed a good linear relationship within the range of 0.115 2～0.268 8μg（r=0.999 9）.The average recovery was 97.34% ａnd RSD was 1.48%（n=6）. the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places was within the range of 1.50～2.10 mg·g-1.ConclusionThe method is simple ａnd the result was reliable. It can be used for the quality control of this herbal medicine.

　　Key words： Fructus Alpinia oxyphyllae； Nootkatone

中藥益智，為姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實，主產于我國的海南和廣東，為四大南藥之一。其功效為溫脾止瀉，攝唾涎，暖腎，固精縮尿，主治脾寒泄瀉，腹中冷痛，口多涎唾，腎虛遺尿，小便頻數，遺精白濁［1］。我們的前期研究發現，益智石油醚提取部位為其縮尿作用的有效部位，并且通過氣相色譜�操|譜聯用分析，發現此部位中的主要化學成分為圓柚酮（Nootkatone）［2］。國外已有研究報道，從益智藥材中分離得到的圓柚酮，在抗實驗性胃潰瘍、抑制脂多糖活化巨噬細胞中NO的產生和抑制由抗原引發的RBL��2H3細胞的脫落等方面具有顯著的活性，為益智藥材的有效成分之一［3］。而對于益智藥材中圓柚酮的含量情況還未見相關報道。為了更好地控制藥材質量，我們采用高效液相色譜法建立了益智藥材中圓柚酮的含量測定方法，并測定不同產地藥材中圓柚酮的含量。

　　1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀，HPChemStation 6.04軟件包（美國Agilent公司）；賽多利斯Bp211DAG電子天平（德國Sartorius公司）；超聲波清洗器CX��100（北京醫療設備二廠）。圓柚酮對照品由美國Sigma公司提供（批號：10112423，純度>98%）。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。不同產地的藥材由成都中醫藥大學謝秀瓊教授從各產地收集，并經成都中醫藥大學盧先明教授鑒定為姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實。

　　2 方法與結果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱為Diamonsil�睠18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動相為乙腈�菜�（65∶35）；檢測波長為235 nm；流速為1.00 ml·min-1；柱溫為40℃。靈敏度為0.005AUFS。在選定條件下，圓柚酮與樣品中其他色譜峰達基線分離，其理論塔板數（N）大于4 000。對照品溶液和供試品溶液色譜圖見圖1～2。

　　2.2 對照品溶液的制備

　　取圓柚酮對照品適量，精密稱定，置25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成含圓柚酮0.480 0 mg·ml-1的對照品溶液。

　　2.3 供試品溶液的制備

　　取益智藥材，除去雜質及外殼，粉碎，過40目篩。取粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇25 ml，稱定重量，超聲提�。�360 W，35 kHz）30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

　　2.4 線性關系考察

　　精密吸取圓柚酮對照品溶液（0.480 0 mg·ml-1） 0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，分別置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣10 μl測定峰面積。以對照品進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，則回歸方程為：A=3 237.2C 4.33，r=0.999 9。表明圓柚酮在0.115 2～0.268 8 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

　　2.5 精密度實驗

　　精密吸取上述對照品溶液10 μl，重復進樣5次，峰面積RSD=0.20%，表明儀器的精密度良好。

　　2.6 重復性實驗

　　取同一批樣品（海南省瓊中縣出產）5份，分別按供試品溶液的制備方法制備，進樣10 μl，測定峰面積，計算含量。其RSD=1.23%，表明該方法重復性良好。

　　2.7 穩定性實驗

　　取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h進樣10 μl，測定峰面積，計算含量。其RSD=0.32%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

　　2.8 加樣回收率實驗

　　取6份已知含量的樣品（海南省瓊中縣出產，含量為2.10 mg·g-1）約0.1 g，精密稱定，分別加入圓柚酮對照品溶液（0.480 0mg·ml-1） 0.5 ml。按供試品溶液的制備方法制備，進樣10 μl，測定峰面積，計算回收率。結果見表1，平均回收率為97.34%，RSD=1.48%。表1 加樣回收率實驗結果 （略）

　　2.9 樣品的含量測定取不同產地的益智藥材,用本實驗方法測定。結果見表2。表2 不同產地益智藥材中圓柚酮含量測量結果（略）

　　3 討論

圓柚酮（Nootkatone）又稱諾卡酮，是屬于雅檻藍烷（eremophilane）系的雙環倍半萜酮。其甲醇溶液在200～400 nm波長下掃描，結果在235 nm波長處存在最大吸收峰，故選擇235 nm作為檢測波長。

　　益智從《中國藥典》1963版Ⅰ部即開始收載，現行版《中國藥典》的含量測定項下只要求本品種子含揮發油不得少于1.0%（ml·g-1），對于其中指標性成分的含量限度暫無規定。本文建立了益智藥材中圓柚酮的高效液相色譜含量測定方法，并對不同產地藥材樣品進行含量測定，結果重復性好、精密度高、操作簡便，效果滿意，可作為益智藥材的質量控制方法，也可為益智藥材的栽培及收購等提供參考。