標題分光光度法測定夏枯草中總皂苷的含量

【摘要】［目的］測定夏枯草藥材中總皂苷的含量。［方法］甲醇超聲提取夏枯草樣品溶液，5％香草醛－冰醋酸顯色，分光光度法測定樣品中總皂苷含量。［結果］總皂苷在26.95～94.31μg范圍內與吸光度呈良好的線性關系，回收率在97.0％～100.5％之間；三批夏枯草樣品中總皂苷的含量在2.02%～2.56%之間。［結論］分光光度法測定夏枯草中總皂苷的含量，方法準確可靠、操作簡便。
　　
　　【關鍵詞】夏枯草;總皂苷;分光光度法;含量測定
　　
　　夏枯草為唇形科植物夏枯草（BrunellaecumfructuL.）的干燥果穗，具有清火、明目、散結、消腫之功效，用于目赤腫痛，頭痛眩暈，瘰疬，乳癰腫痛，高血壓，急性黃疸型傳染性肝炎等病癥［1］。夏枯草含有齊墩果酸等三萜類成分、β�补如薮嫉如摅w類成分、木犀草素等黃酮類成分、香豆素、苯丙素、有機酸、揮發油等成分，現代藥理學研究表明，其具有降壓、降糖、抗炎、免疫抑制、抗菌、抗病毒等作用［2］。本文采用紫外分光光度法測定夏枯草中總皂苷的含量，為夏枯草研究的進一步完善及質量控制提供實驗依據。
　　
　　1實驗材料
　　
　　1.1實驗儀器與試劑
　　
　　3300pro紫外�部梢姺止夤舛扔�，安瑪西亞中國有限公司；水浴鍋：上海；所用試劑均為分析純；對照品：齊墩果酸（1107092－200304，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；夏枯草藥材：取自本院藥房，產地浙江。
　　
　　2實驗方法與結果
　　
　　2.1對照品溶液的制備
　　
　　取齊墩果酸對照品適量，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液（每ml相當于0.135mg齊墩果酸）。
　　
　　2.2供試品溶液的制備
　　
　　夏枯草藥材，粉碎，取藥材粉末約0.5g，稱定重量，置于50ml容量瓶中，加入甲醇50ml，稱重，超聲45min，取出，甲醇補足失重，過濾，取續濾液。
　　
　　2.3最大吸收波長的選擇
　　
　　取適量供試品和對照品溶液，分別置具塞試管中，揮干溶劑，加入5％香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴15min，取出置冰水浴冷卻后加入5ml冰醋酸，搖勻，在400～700nm波長范圍內掃描，結果表明，樣品與對照品在550nm附近均有最大吸收峰，綜合考慮，選擇550nm作為測定波長。
　　
　　2.4標準曲線的制備
　　
　　分別取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置具塞試管中，揮干溶劑，精密加入5％香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴15分鐘，取出置冰水浴冷卻后加入5ml冰醋酸，搖勻，在550nm處測定吸光度�；貧w方程為Y=0.008x-0.0146（r=0.9991），在26.95～94.31μg范圍內總皂苷（以齊墩果酸計）與吸光度線性關系良好。
　　
　　2.5顯色穩定性試驗
　　
　　取供試品溶液0.2ml置具塞試管中，揮干溶劑，按標準曲線制備項的方法測定吸光度，連續測定2h，結果表明2h內穩定。
　　
　　2.6精密度試驗
　　
　　取同一供試品溶液0.2ml加入具塞試管中，揮干溶劑，按標準曲線制備項的方法測定吸光度，連續測定6次，吸光度依次為0.395、0.395、0.394、0.394、0.394、0.395，表明儀器精密度良好（RSD=0.17％）。
　　
　　2.7重復性試驗
　　
　　分別取同一批夏枯草樣品五份，按“供試品溶液制備”項下方法制成供試液，取0.2ml置具塞試管中，揮干溶劑，按照標準曲線制備項下的方法測定吸光度，計算樣品中總皂苷的含量依次為2.59％、2.59％、2.50％、2.47％、2.49％，表明，重復性良好（RSD=2.28%）。
　　
　　2.8加樣回收率試驗
　　
　　取已知含量的同批樣品，分別添加一定量的齊墩果酸對照品，按“供試品溶液制備”項下方法制成供試液，取供試液溶液適量加入具塞試管中，揮干溶劑，按照標準曲線制備項下方法測定吸光度，計算回收率，結果見表1，本實驗方法回收率在97.0～100.5％之間，符合回收率要求（95％～105％）。表1總皂苷加樣回收結果（略）
　　
　　回收率=（實測量�矘悠分械牧浚�/對照品加入量×100%
　　
　　2.9樣品中總皂苷含量測定
　　
　　取不同批次夏枯草藥材，按“供試品溶液制備”項下方法制成供試液，取0.2ml置具塞試管中，揮干溶劑，按照標準曲線制備項下的方法測定吸光度，計算樣品中總皂苷的含量，見表2。表2不同批夏枯草藥材中總皂苷含量測定結果（略）
　　
　　3討論
　　
　　夏枯草研究以藥理學研究居多，其藥學的研究主要以苯丙素、三萜類成分等的分離、純化和結構鑒定以及齊墩果酸和熊果酸、咖啡酸和迷迭香酸等成分等的含量測定為主；總類成分的研究較少，僅限于總黃酮及多糖的分離純化等工藝研究，而對另一類成分皂苷的研究則少之又少。夏枯草含有的以齊墩果酸和熊果酸為主的三萜皂苷類成分具有降壓［3］等藥理作用，這些成分含量的高低將直接影響夏枯草的生理活性。中藥的療效并不是單一成分引起的，可能是一組或是一群物質共同引起的藥理作用。藥效指導下的部位分離是中藥新藥研發的一條有效途徑。本文建立了夏枯草中總皂苷的含量測定方法，為夏枯草有效部位的提取工藝研究及制劑的開發提供一個質量控制手段。本文僅測定了本院藥房三批藥材中總皂苷的含量，三批藥材間皂苷的含量雖有差異但比較接近；不同產地夏枯草中總皂苷的含量及差異將在下一步實驗中進行，以期為夏枯草藥材的產地選擇及質量控制提供另一衡量標準。
　　
　　目前尚不能得到夏枯草皂苷的對照品，夏枯草中皂苷的苷元基本是齊墩果烷型，采用齊墩果酸作為標準對照品可行。