標題山萘酚胃漂浮膠囊釋放度的高效液相色譜法測定

【摘要】目的建立高效液相色譜（HPLC）法測定山萘酚胃漂浮膠囊的釋放度。方法采用HypersilODS（4.6mm×150mm,5μm）色譜柱，流動相甲醇-4‰醋酸溶液（48∶52），流速為0.8ml·min-1，檢測波長360nm，柱溫45℃。結果線性范圍在5.0～40.0μg·ml-1范圍內線性關系良好，方法回收率為100.49%，RSD為2.10%（n=9），精密度良好。結論該方法靈敏、準確、專屬性強，用于山萘酚胃漂浮膠囊釋放度測定結果滿意。
　　
　　【關鍵詞】山萘酚;胃漂浮膠囊;釋放度;高效液相色譜
　　
　　山萘酚胃漂浮膠囊是貴州大學貴州省生化工程中心開發研究的抗胃癌靶向中藥新制劑，其主藥山萘酚對多種腫瘤細胞有抑制作用，特別是對胃癌的治療方面近年來已取得較多的進展，如：山萘酚可通過下調凋亡抑制基因bc1-2表達來誘導胃癌細胞凋亡，從而發揮抑制腫瘤生長轉移作用[1]，山萘酚的攝入能夠降低西班牙人胃癌的發病率[2]。將山萘酚制成胃漂浮膠囊劑，可以延長藥物在胃內的滯留時間，減少給藥次數，延長山萘酚的吸收，提高生物利用度和靶向性治療胃癌。為了更好地確保該藥的質量，我們采用HPLC法，對山萘酚的體外釋放度進行含量測定，為評價和控制該藥的質量提供了依據。
　　
　　1儀器與村料
　　
　　1.1儀器1100型HPLC儀（美國Agilent公司），色譜柱為依利特C18柱（4.6mm×150mm,5μm），DV215CD型電子分析天平（上海奧豪斯公司），ZRS-8G型智能溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）。
　　
　　1.2試劑及藥品山萘酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為：110861-200808），甲醇（色譜純），醋酸（分析純），水為重蒸水。山萘酚胃漂浮膠囊（貴州大學貴州省生化工程中心研制，批號：20080301，20080303，20080305）。
　　
　　2方法與結果
　　
　　2.1色譜條件色譜柱為HypersilODS色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）;流動相為甲醇-4‰醋酸溶液（48∶52）;檢測波長360nm;流速0.8ml·min-1;柱溫45℃。
　　
　　2.2專屬性實驗按處方比例稱取輔料，加人工胃液（0.1mol·L-1鹽酸溶液）制得相當于30.0μg·ml-1山萘酚濃度的空白輔料溶液，濾過，精密量取20μl注入色譜儀，記錄色譜峰，見圖1a。另將一�？瞻啄z囊殼溶于900ml人工胃液（0.1mol·L-1鹽酸溶液）中，濾過，精密量取續濾液20μl注入色譜儀，記錄色譜峰，見圖1b。精密稱取山萘酚對照品5.0mg，置于50ml量瓶中，加甲醇振搖超聲溶解，冷卻后定容，得到質量濃度為0.1mg·ml-1的儲備液，精密量取儲備液3ml置于10ml量瓶中，加人工胃液（0.1mol·L-1鹽酸溶液）稀釋至刻度，得含山萘酚30μg·ml-1的溶液，精密量取續濾液20μl注入色譜儀，記錄色譜峰（見圖1c）。計算得山萘酚的理論塔板數為4300，拖尾因子為1.0。a-空白輔料b-空白囊殼c-對照品1.山萘酚圖1HPLC圖
　　
　　2.3標準曲線的制備精密量取上述儲備液適量，置于10ml量瓶中，加人工胃液（0.1mol·L-1鹽酸溶液）稀釋至刻度，搖勻，分別得到質量濃度為5.0，10.0，20.0，30.0，40.0μg·ml-1的系列標準溶液，精密吸取各系列標準溶液20μl注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以藥物濃度對峰面積進行線性回歸，得到山萘酚的線性回歸方程為：Y=19.611X 22.97（r=0.9997）。結果表明山萘酚質量濃度為5.0～40.0μg·ml-1內呈良好的線性關系。
　　
　　2.4回收率實驗分別精密稱取山萘酚原料適量，加入處方比例輔料，用人工胃液（0.1mol·L-1鹽酸溶液）配制標示量質量分數為50%、80%、100%的供試品溶液，分別精密量取供試品續濾液各20μl進樣，記錄峰面積，按“2.3”項的回歸方程計算回收率。結果見表1。表1回收率實驗結果
　　
　　2.5重復性實驗取濃度約為30.0μg·ml-1的山萘酚溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖，結果RSD值為1.8%。
　　
　　2.6穩定性實驗取以上溶液于室溫、陽光不直射的情況下放置，分別在0，2，4，8，10h精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜峰面積變化在2.0%范圍內，表明溶液在10h內穩定。
　　
　　2.7釋放度實驗方法參照《中國藥典》（2005年版），采用轉籃法測定山萘酚胃漂浮膠囊的體外釋放度。以900ml人工胃液（0.1mol·L-1鹽酸溶液）為溶出介質，轉速為100r·min-1，依法操作。取樣點時間為1.0，2.0，4.0，6.0，8.0h。分別取5ml溶液，用0.45μm微孔濾膜過濾，并及時補充5ml介質。分別精密量取續濾液各20μl進樣，記錄峰面積。按“2.3”項的回歸方程計算累計釋放量。
　　
　　2.8釋放度均一性實驗取山萘酚胃漂浮膠囊一批共36粒，分別6次按實驗方法測定釋放度。結果見表2。結果表明山萘酚胃漂浮膠囊釋放均一性良好。表2釋放度均一性實驗結果
　　
　　2.9釋放度測定結果取山萘酚胃漂浮膠囊3批樣品，照上述釋放度測定方法測定釋放度（見圖2）。結果表明3批山萘酚胃漂浮膠囊在8h時的累計釋放平均值達80%以上，符合《中國藥典》釋放度要求。圖2釋放度測定結果
　　
　　3討論
　　
　　本方法測定的山萘酚胃漂浮膠囊的凝膠骨架材料為羥丙甲基纖維素和海藻酸鈉，兩種輔料均不干擾測定，且具有較適宜的水化速率和溶蝕速率，故漂浮和緩釋性能較好。在實驗過程中我們對不同顏色、不同廠家、不同批號的膠囊殼，在360nm處進行了吸收度測定，發現其吸收值各不相同，尤其是不同顏色的膠囊殼吸收值差別更大。本文通過方法學考察建立了HPLC法測定山萘酚胃漂浮膠囊的釋放度，本方法靈敏、準確、專屬性強，能夠更好的控制山萘酚胃漂浮膠囊制劑的質量，也可用于山萘酚其它制劑的釋放度測定。