標題什么是化學發光免疫分析（CLIA）

化學發光免疫分析（Chemiluminescence analysis,CLIA）誕生于1977年。根據放射免疫分析的基本原理，將高靈敏的化學發光技術與高特異性的免疫反應結合起來，建立了化學發光免疫分析法。CLIA具有靈敏度高、特異性強、線性范圍寬、操作簡便、不需要十分昂貴的儀器設備等特點。CLIA應用范圍較廣，既可檢測不同分子大小的抗原、半抗原和抗體，又可用于核酸探針的檢測。CLIA與放射免疫分析（RIA）、熒光免疫分析（IFA）及酶免疫分析（EIA）相比，具有無輻射、標記物有效期長并可實現全自動化等優點。CLIA為獸醫、醫學及食品分析檢測和科學研究提供了一種痕量或超痕量的非同位素免疫檢測手段。
1.化學發光免疫分析技術的基本原理
化學發光免疫分析含有免疫分析和化學發光分析兩個系統。免疫分析系統是將化學發光物質或酶作為標記物，直接標記在抗原或抗體上，經過抗原與抗體反應形成抗原一抗體免疫復合物�；瘜W發光分析系統是在免疫反應結束后，加入氧化劑或酶的發光底物，化學發光物質經氧化劑的氧化后，形成一個處于激發態的中間體，會發射光子釋放能量以回到穩定的基態，發光強度可以利用發光信號測量儀器進行檢測。根據化學發光標記物與發光強度的關系，可利用標準曲線計算出被測物的含量。
2.化學發光免疫分析法的類型
化學發光免疫分析法根據標記物的不同可分為三大類，即化學發光免疫分析、化學發光酶免疫分析
和電化學發光免疫分析法。
2.1 化學發光免疫分析
化學發光免疫分析是用化學發光劑直接標記抗體或抗原的一類免疫測定方法。目前常見的標記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學發光劑。
2.1.1 魯米諾類標記的化學發光免疫分析：魯米諾類物質的發光為氧化反應發光。在堿性溶液中，魯米諾可被許多氧化劑氧化發光，其中H2o2最為常用。因發光反應速度較慢，需添加某些酶類或無機催化劑。酶類主要是辣根過氧化物酶（HRP），無機類包括O3、鹵素及Fe3 、Cu2 、Co2 和它們的配合物。早期主要用于無機物和有機生物小分子的測定，靈敏度因標記后發光強度降低而降低。人們發現發光體系中加入某些酚類及其衍生物、胺類及其衍生物和苯基硼酸衍生物對體系的發光均有顯著增強作用，發光強度可提高1000倍，并且“本底”發光顯著降低，發光時間也得到延長。這些增強劑的使用，使化學發光免疫分析在蛋白、核酸分析領域得到廣泛的應用。
2.1.2 吖啶酯類標記的化學發光免疫分析：吖啶酯用于CLIA由于熱穩定性不是很好，經研究合成了更穩定的吖啶酯衍生物。在H2o2和OH一條件下，吖啶酯類化合物能迅速發光，量子產率很高，如吖啶芳香酯的量子產率可達0.05，吖啶酯作為標記物用于免疫分析，發光體系簡單、快速，不需要加入催化劑，且標記效率高，本底低。這些特點引起廣大分析診斷工作者的極大興趣。
2.2 化學發光酶免疫分析
化學發光酶免疫分析（Chemiluminescent enzymeimmunoassay，cLEIA）屬酶免疫分析，只是酶反應的底物是發光劑，操作步驟與酶免分析完全相同：以酶標記生物活性物質進行免疫反應，免疫反應復合物上的酶再作用于發光底物，在信號試劑作用下發光，用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶（HRP ）和堿性磷酸酶（ALP），它們有各自的發光底物。HRP最常用發光底物是魯米諾及其衍生物。在CLEIA中，使用過氧化物酶標記抗體，進行免疫反應后，利用魯米諾作為發光底物，在過氧化物酶和起動發光試劑（NaOH和H2o2）作用下魯米諾發光，酶免疫反應物中酶的濃度決定了化學發光的強度。此傳統的化學發光體系（HRP-H2O2-LUMINOL）為幾秒內瞬時閃光，存在發光強度低、不易測量等缺點。后來，在發光系統中加入增強發光劑，以增強發光信號，并在較長的時間內保持穩定，便于重復測量，從而提高分析靈敏度和準確性。
堿性磷酸酶（ALP）已廣泛用于酶聯免疫分析和核酸雜交分析。堿性磷酸酶和1，2．二氧環乙烷構成的發光體系是目前最重要、最靈敏的一類化學發光體系。這類體系中具有代表性的是ALP-AMPPD發光體系。在溶液中AMPPD的磷酸酯鍵很穩定，非酶催化的水解非常慢，在pHl2的0.05 mol／L碳酸鈉緩沖溶液中，分解半衰期可達74年，幾乎沒有試劑本身的發光背景。AMPPD為磷酸酯酶的直接發光底物，可用來檢測堿性磷酸酶或抗體、核酸探針及其他配基的結合物。ALP-AMPPD發光體系具有非常高的靈敏度，對標記物ALP的檢測限達10-21 mol，是最靈敏的免疫測定方法之一。對AMPPD加以改進，獲得具有更好反應動力學和更高
靈敏度的新一代產物：CSPD、CDP-Star。這些體系已廣泛用于各種基因、病原體DNA的鑒定。
2.3 電化學發光免疫分析
電化學發光免疫分析（Electrochemiluminescence，ECL）是指由電化學反應引起的化學發光過程。ECL的反應在電極表面進行，發光底物為三聯吡啶釕[Ru（byp）2+3 ]，三丙胺（TPA）用來激發光反應。在陽極表面，兩種物質同時失去電子。在電極板上Ru（byp）2+3 被氧化成Ru（byp）3+3,TPA也被氧化成陽離子自由基（TPA+# ），TPA+#自發地釋放一個質子而變成非穩定分子（TPA* ），將一個電子遞給Ru（byp）3+3，形成激發態的Ru（byp）2+3。Ru（byp）3+3在衰減的同時發射一個波長為620NM的光子，重新回到基態Ru（byp）2+3。這一過程在電極表面反復進行，產生高效、穩定的連續發光，并不斷增強。
ECL的突出優點是：①標記分子小，可實現多標記，標記物非常穩定；②發光時間長，靈敏度高；③光信號線性好，動力學范圍寬，超過6個數量級；④可重復測量，重現性好；⑤可實現多元檢測和均相免疫分析；⑥快速，完成一個樣品的分析通常只需18 min；⑦可實現全自動化。由于電化學發光免疫分析具有優越性，是一種很有發展前途的免疫分析法，日益受到人們的重視，目前已廣泛應用于抗原、半抗原及抗體的免疫檢測。