標題常用的滅菌方法及滅菌條件及驗證的基本要求

常用的滅菌方法有蒸汽濕熱滅菌法、干熱滅菌法、氣體滅菌法、輻射滅菌法和過濾除菌法�？筛鶕�被滅菌物品的特性采用一種或多種方法的組合滅菌。只要產品允許，一般應盡可能選用終端最終滅菌法（即產品分裝至包裝容器后再滅菌）滅菌。若產品不適合采用終端最終滅菌法，可選用過濾除菌法或無菌生產工藝達到無菌保證要求，只要可能，應對非最終滅菌的產品作補充性滅菌處理（如流通蒸汽滅菌）。
一、蒸汽濕熱滅菌法
本法系指將物品置于滅菌柜內利用高壓飽和蒸汽或流通蒸汽滅菌、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質、核酸發生變性而殺滅微生物的方法。流通蒸汽不能完全殺滅細菌孢子，一般可作為不耐熱無菌產品的輔助滅菌手段。高壓蒸汽滅菌該法滅菌能力強，為熱力學滅菌中最有效、應用最廣泛的滅菌滅菌方法。藥品、容器、培養基、無菌衣、膠塞以及其他其它遇高溫和潮濕不發生變化或損壞的物品，均可用本法滅菌。流通蒸汽不能完全殺滅細菌孢子，一般可作為不耐熱無菌產品的輔助滅菌手段。
1. 蒸汽滅菌的有關參數
（1）D值
D值即微生物的耐熱參數，系指一定溫度下，殺滅90%微生物所需的時間，以分表示。D值越大，表明該微生物的耐熱性越強。不同的微生物在不同環境條件下具有不同的D值。
滅菌方法驗證時，微生物的耐熱參數一般使用D121℃ 。
（2）Z值
Z值即滅菌溫度系數，系指使某一種微生物的D值下降一個對數單位，滅菌溫度應升高的值（℃），通常取10℃。它被用于定量的描述孢子對滅菌溫度變化的敏感程度，Z值越大孢子對溫度的敏感性越弱。
（3）FT值
FT值系指給定的Z值下，滅菌程序所賦予待滅菌品在溫度T下的滅菌時間，以分表示。
LgP=lgN0- FT/DT
式中P為滅菌產品中微生物存活的概率。
N0為產品滅菌前微生物的數量。
滅菌溫度高時，FT值就小，滅菌溫度較低時，所需FT值就大。
（4）滅菌率L
L值系指在某溫度下滅菌1分鐘所相應的標準滅菌時間（分）， 即F0和FT的比值（L= F0/FT = D121℃ /DT）。不同Z值、不同溫度下的L值是不同的，滅菌率均可查得。
（5） F0值
F0值即標準滅菌時間，系指滅菌過程賦予待滅菌物品在121℃下的等效滅菌時間，即T=121℃、Z=10℃時的FT值。121℃為標準狀態，F0值即為標準滅菌時間，以分表示。一個滅菌程序的總的標準滅菌時間F0，應包括加熱及冷卻過程。它可以用滅菌率對時間求積分的方法計算而得。
F0=∫t2t1L•dt
式中dt為測定的間隔時間，相鄰兩次的間隔時間通常取1分鐘。
100℃以下，L值可以忽略。F0是作為滅菌過程中監控物品達到無菌保證的重要手段�，F代滅菌器上設置有F0值自動顯示系統。
上述參數及其關系為蒸汽滅菌程序的設計、驗證及日常滅菌效果的監控提供了理論依據。
高壓蒸汽濕熱滅菌條件一般通常采用121℃×20min或116℃×40min的程序，也可采用其它溫度和時間參數�？傊�，必須保證物品滅菌后的SAL≤10-6�？傊�，必須驗證所采用的滅菌條件能達到無菌保證要求。在實際應用中，對熱穩定的產品或物品，可采用過度殺滅法菌，其SAL應≤10-1212。對熱極為敏感的產品，可的允許標準滅菌時間F0可低于8min。，但對F0低于8的滅菌程序要求應在生產全過程中，對產品中污染的微生物嚴加監控，并采取各種措施防止耐熱菌污染及降低微生物污染水平，以確保被滅菌滅菌產品達到無菌保證要求。滅菌物品的表面必須潔凈，不得污染有機物質。必要時，外表應用適宜的包皮寬松的包裹，特別是燒瓶、試管等容器的塞子要防止脫落。滅菌柜內的物品裝載方式應保證滅菌蒸汽徹底穿透物品，且不影響蒸汽穿透速度和滅菌后的干燥程度。滅菌柜中的空氣應排空并被飽和蒸汽完全替代,以保證表壓與滅菌柜內壓力的一致。
采用濕熱滅菌時[d1] ，被滅菌物品應有適當的包裝和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性。
蒸汽滅菌法濕熱滅菌工藝驗證時，應進行熱分布試驗、熱穿透試驗和生物指示劑驗證試驗。以確定滅菌柜空載及不同裝載時腔室里中的熱分布狀況及可能存在的冷點；在空載條件下，確認121℃時腔室的各點的溫度差值應≤±1℃、；使用插入實際物品或模擬物品內的溫度探頭，確認滅菌柜在不同裝載時，最冷點物品的標準滅菌時間（F0）達到設定的標準；用生物指示劑進一步確認在不同裝載時冷點處的滅菌物品達到無菌保證水平。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子（Spores of Bacillus stearothermophilus）。
二、干熱滅菌法
本法系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設備中、利用干熱空氣達到殺滅微生物或消除熱原物質的方法，在干熱滅菌柜、連續性干熱滅菌系統或烘箱等設備中進行滅菌�？捎眠m用于耐高溫但不宜用蒸汽濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，也是最為有效的除熱原方法之一，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。
干熱滅菌條件一般為160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上，也可采用其它溫度和時間參數�？傊�，應保證滅菌后的產品其SAL≤10-6。干熱過度殺菌殺滅后產品的SAL應≤10-12，此時物品一般無需進行滅菌前污染微生物的測定。干熱滅菌250℃ 45min的干熱滅菌也可除去無菌產品包裝容器及有關生產灌裝用具中的熱原物質。
采用干熱滅菌時，被滅菌物品應有適當的包裝和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性。
用本法滅菌的物品表面必須潔凈，不得污染有機物質，必要時外面應用適宜的包皮寬松包裹。配有塞子的燒瓶、試管等容器口應有金屬箔或紗布等包皮包裹，并用適宜的方式捆扎，防止脫落。干熱滅菌箱內物品排列不可過密，保證熱能均勻穿透全部物品。
干熱滅菌法驗證與蒸汽濕熱滅菌法相同，應進行熱分布試驗、熱穿透試驗、生物指示劑驗證試驗或細菌內毒素滅活驗證試驗。以確認滅菌柜中的溫度分布應符合設定的標準、確定最冷點位置、確認最冷點標準滅菌時間（FH）能保證達到設定標準并達到SAL要求。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子（Spores of Bacillus subtilis）。細菌內毒素滅活驗證試驗是證明除熱原過程有效性的試驗。一般將不小于1000單位的細菌內毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內毒素至少下降3個對數單位。細菌內毒素滅活驗證試驗所用的細菌內毒素一般為大腸桿菌內毒素（Escherichia coli endoxin）。驗證時，一般采用最大裝載方式。