標題高效液相色譜法測定排石利膽片中芍藥苷的含量

目的建立排石利膽片中芍藥苷含量的測定方法。方法采用高效液相色譜法,色譜柱：HypersilODS-3C18（4.6mm×150mm,5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18∶82）；檢測波長為230nm,流速1.0mL/min。結果芍藥苷在0.06～0.36μg范圍內與峰面積呈良好線性關系,r＝0.9999,平均回收率為99.77%,RSD＝1.35%（n＝6）。結論該方法簡單、快速、準確,可用于該制劑中芍藥苷的質量控制。
　　
　　【關鍵詞】排石利膽片；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定
　　
　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofpaeoniflorininPaishilidantabletsbyHPLC.MethodHypersilODS-3C18column（4.6mm×150mm,5μm）wasused,acetonitrile-0.1%phosphoricacid（18∶82）wasthemobilephase,detectionwavelengthwasat230nm,andtheflowratewas1.0mL/min.ResultThelinearrangeofpaeoniflorinwas0.06～0.36μg,r＝0.9999,andtheaveragerecoverywas99.77%withRSDof1.35%（n＝6）.ConclusionThemethodwassimple,quickandaccurate,andavailableforqualitycontrolofthepreparation.
　　
　　Keywords：Paishilidantablets；paeoniflorin；HPLC；contentdetermination
　　
　　排石利膽片由茵陳、柴胡（醋炙）、金錢草、龍膽、赤芍、郁金、蒲黃、大黃、五靈脂、芒硝10味中藥組成,具有舒肝理氣、排石利膽功能,用于治療膽囊炎、膽石癥,原方收載于《衛生部藥品標準?中藥成方制劑》第20冊。張氏[1]報道了高效液相色譜（HPLC）法測定排石利膽顆粒中龍膽苦苷的含量。李氏等[2]報道了排石利膽片中綠原酸的含量測定方法。目前未見對其中芍藥苷含量測定的報道。為確保制劑質量,我們建立了HPLC法測定排石利膽片中芍藥苷含量的方法,現報道如下。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　島津10A-vp高效液相色譜儀,SPD-ML0Avp二極管陣列檢測器,ShimadzuCLASS-VP色譜工作站。島津UV-1601紫外-可見光分光光度計。AS3120A型超聲波清洗器。芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號110736-200732）,排石利膽片為陜西合生醫藥研究所劑型研發制劑,批號20090805、20090807、20090811。乙腈（色譜純）,純化水,其他試劑為分析純。
　　
　　2方法與結果
　　
　　2.1色譜條件
　　
　　色譜柱：HypersilODS-3C18（150mm×4.6mm,5μm）,流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18∶82）,檢測波長為230nm,流速1.0mL/min。理論塔板數按芍藥苷色譜峰計應不低于3000。芍藥苷與其他組分完全分離。
　　
　　2.2溶液的制備
　　
　　2.2.1對照品溶液取芍藥苷對照品適量,加甲醇制成含芍藥苷0.024mg/mL的溶液。
　　
　　2.2.2供試品溶液將供試品研為細粉,取約0.9g,精密稱定,置50mL容量瓶中,加甲醇約40mL,搖勻,超聲（120W,40kHz）處理30min,放至室溫,加甲醇至刻度,搖勻,微孔濾膜（0.45μm）濾過,即得。
　　
　　2.2.3陰性對照溶液按處方比例稱取缺赤芍的藥材,按照排石利膽片生產工藝制備后作為陰性樣品,按“2.1.2”項下方法制成陰性對照溶液。
　　
　　2.3干擾試驗
　　
　　精密量取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。對照品溶液與供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰,陰性樣品對測定無干擾（見圖1）。
　　
　　AB
　　
　　C
　　
　　注：A.對照品；B.供試品；C.陰性對照
　　
　　圖1排石利膽片HPLC圖譜
　　
　　2.4線性關系的考察
　　
　　分別精密吸取對照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL注入液相色譜儀中,按上述色譜條件進行測定。以進樣量X為橫坐標,色譜峰面積Y為縱坐標,經線性回歸,得回歸方程：Y＝1.724×106X－1.060×104,r＝0.9999。結果表明,芍藥苷在0.06～0.36μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。
　　
　　2.5精密度試驗
　　
　　精密吸取同一對照品溶液10μL,連續進樣5次,測定芍藥苷的峰面積,結果RSD＝1.67%（n＝5）。
　　
　　2.6重復性試驗
　　
　　取同一批樣品（批號20090805）5份,按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液,進樣10μL,結果芍藥苷平均含量為4.92mg/g,RSD＝1.45%（n＝5）。
　　
　　2.7穩定性試驗
　　
　　精密吸取同一供試品溶液10μL,分別于0、2、6、12、24h進樣測定,結果RSD＝1.70%（n＝5）,表明供試品溶液至少在24h內穩定。
　　
　　2.8加樣回收率試驗
　　
　　精密稱取已知含量樣品（4.92mg/g）6份,分別精密加入芍藥苷對照品甲醇溶液（濃度為2.40mg/mL）1mL,再按供試品溶液制備方法制備,進樣10μL,測定計算回收率。結果見表1。
　　
　　表1加樣回收率試驗結果（n＝6）
　　
　　稱樣量
　　
　�。╣）供試品含
　　
　　量（mg）加入量
　　
　�。╩g）測得量
　　
　�。╩g）回收率
　　
　�。�%）平均回收
　　
　　率（%）RSD
　　
　�。�%）
　　
　　0.47552.342.404.7399.65
　　
　　0.48602.392.404.81100.83
　　
　　0.48252.372.404.7498.6399.771.35
　　
　　0.49252.422.404.8299.91
　　
　　0.48622.392.404.83101.62
　　
　　0.47552.342.404.7399.65
　　
　　2.9樣品含量測定
　　
　　按供試品溶液制備方法制備供試液,進樣10μL測定,照外標法計算樣品中芍藥苷含量,結果見表2。
　　
　　表2芍藥苷含量測定結果
　　
　　批號芍藥苷含量（mg/g）
　　
　　200908054.92
　　
　　200908074.25
　　
　　200908114.26
　　
　　3討論
　　
　　經對芍藥苷紫外掃描,在230nm處有最大吸收,因此,檢測波長選取230nm。
　　
　　供試品溶液的制備我們先考察了熱回流法,結果隨著時間增加,含量有降低趨勢。這可能與芍藥苷對熱不穩定有關[3]。因此選用超聲提取法。在提取時間上,考察了超聲處理15、30、45min,結果超聲30min時含量較高。在供試品溶液制備中分別考察了50%乙醇、甲醇超聲30min提取,結果兩者含量無明顯差異,但50%乙醇提取液色譜基線雜質峰較多,因此,供試品溶液制備采用甲醇提取。