標題人促卵泡刺激激素(FSH)ELISA試劑盒詳細說明書

中文名稱：人促卵泡刺激激素（FSH）ELISA試劑盒

英文名稱：Human FSH ELISA KIT

方法：ELISA（酶免）、定量
規格：96T

一、用途

本試劑盒用于人血清中促卵泡刺激素（FSH）濃度的定量檢測。

二、概述及檢測原理

促卵泡激素（FSH）和黃體激素（LH）與性腺組織的生長和生殖活動密切相關。性腺組織中合成和分泌的雄性和雌性性激素通過負反饋控制著FSH和LH的循環水平。

FSH是垂體前葉的嗜堿細胞分泌的糖蛋白。促性腺素釋放激素（GnRH）由下丘腦產生，控制著垂體前葉中FSH的釋放。象其它糖蛋白如LH、TSH和HCG一樣，FSH是由α和β亞基組成的。這類激素的α亞基的結構是很相似的，因此，這些激素的生物學和免疫學特性的區別取決于其獨特的β亞基。

在女性體內，FSH通過作用于顆粒細胞上的受體，刺激著卵巢卵泡的發育和成熟，同時促進了卵泡類固醇和LH的生成。生成的LH結合到膜細胞上，進一步刺激類固醇的生成。卵巢內的雌二醇量隨著卵泡的成熟而增加，因此，這促進FSH受體的活性和FSH卵泡的結合能力。所以，FSH、LH和雌二醇在維持女性卵巢復原和成熟方面密切相關。

在絕經或卵巢切除后，以及早熟卵巢的衰退期，FSH的水平升高。FSH的水平由雌激素通過負反饋進行調控。FSH和LH，或者FSH和雌激素之間的關系一旦失衡，有可能引起神經性厭食和多囊卵巢的疾病。當隨機的FSH濃度超過40mIU/ml時，則表明卵巢衰退，盡管也有些明顯的例外。

在男性體內，生精小管的發育和生精作用的保持都是由FSH調控的。不過，雄激素并不象雌激素一樣會降低FSH水平。因此，證明負反饋關系只能通過血清LH。

不太清楚是什么原因，缺精子或少精子的男性體內的FSH的水平經常提升。經放射性免疫測定，受試者的腫瘤通常會降低血清FSH濃度，但卻提高了LH的水平。會引起與受試者腫瘤分泌的類似人絨毛膜促性腺激素（hCG）物質發生交叉反應。

男性體內高水平的FSH會在睪丸衰退和克蘭費爾特氏綜合癥的初期出現。FSH的濃度在饑餓、腎衰竭、甲狀腺機能亢進和肝硬化時也會有所提高。

BioCheck FSH ELISA檢測的原理是基于固相酶聯免疫吸附檢測。該檢測系統是利用了作為固相（微孔板）固定劑的鼠單克隆抗α-FSH抗體，以及抗體酶（辣根過氧化物酶）結合物溶液中的鼠單克隆抗β-FSH抗體。被測樣品同時與兩個抗體發生反應致使FSH分子夾在固相和酶聯抗體之間。室溫下溫育45分鐘后，用去離子水或蒸餾水洗掉未結合的標記抗體。然后加入四甲基聯苯胺（TMB），在室溫下溫育20分鐘，溶液逐漸變藍。加入HCL后，終止顏色變化，溶液最終呈黃色。再用分光光度計在450nm波長下測定黃色溶液的吸光值，FSH濃度與檢測樣品色度成正比關系。

二、試劑盒的組成

1．包被有抗體的微孔板：96孔，1塊。

2．參照標準品：1套（0，5，15，50，100和200mIU/mL）。

3．酶聯試劑：13mL。

4．TMB試劑（一步）：11mL。

5．終止液（1N HCL）：11mL。

三、自備材料

1．精密吸管50µL，100µL，200µL和1.0mL。

2．一次性吸頭。

3．蒸餾水。

4．渦旋混合器或等同物。

5．吸水紙或紙巾。

6．坐標紙。

7．酶標儀。

四、樣品的采集和準備

血清由全血樣品制備，用于本試劑盒的血清樣品須無任何添加物。

五、試劑盒的保存和所用儀器

未啟封的試劑盒須保存在2~8℃下；微孔板放在有干燥劑的密封袋里，以盡量減少其在潮濕空氣中的暴露；已啟封的試劑盒在上述保存條件下，在有效期內可保持穩定。用酶標儀在450nm處測定吸收值時，要求譜寬≤l0nm，光密度值（O.D.）在0~2之間或更大些。

六、試劑的準備
1．在檢測前要使所有試劑達到室溫（18~25℃，下同）。

2．用1.0mL蒸餾水溶解每個凍干的標準品（最少需20分鐘）。已溶解的標準品須在2~8℃下密封保存。

七、檢測步驟

1．將所需數量的微孔固定在微孔架上，標注加樣順序，制作數據表。
2．分別吸取50µL標準品、樣品加入到相應的微孔中。建議：雙份設置標準品、樣品。

3．取100µL酶聯試劑分別加入到每個微孔中。

4．充分混合30秒鐘（此步至關重要）。

5．室溫（18~25℃）溫育約45分鐘。

6．翻轉微孔板，棄掉溫育混合物。

7．用蒸餾水沖洗微孔5次（請勿使用自來水）。

8．在吸水紙或紙巾上扣擊微孔以完全除去微孔中殘存的水滴。

9．向每個微孔中分別加入100µL的TMB試劑，輕輕混合10秒鐘。

10．室溫暗處溫育20分鐘。

11．向每個微孔加入100µL終止液（1N HCL）終止反應。

12．輕輕地混合30秒鐘（確保藍色全部變成黃色，此步至關重要）。

13．用酶標儀在450m處于15分鐘內讀出光密度值。

注意：沖洗是關鍵步驟，不適當的沖洗會導致精確度不準和吸收值讀數錯誤地升高。

八、結果計算
在酶標儀上讀出參照標準品、樣品的平均吸收值（A450）。以每個參照標準品的平均吸收值作縱軸（Y），其相應濃度值（mIU/mL）作橫軸（X），在坐標紙上繪制出標準曲線。根據每個樣品的平均吸收植在標準曲線上找出相應的FSH濃度值（mIU/mL）。
 

九、典型曲線實例

在450nm處測得的光密度值在Y軸上，其相應的FSH濃度值在X軸上，從而得出典型的標準曲線。此標準曲線僅用于示例，不能用于計算未知樣品。每個使用者應根據自己的數據制作出標準曲線。

十、期望值和靈敏度

男性（100名）平均正常值：1lmIU/mL；

女性（150名）平均正常值：12mIU/mL；

絕經后女性（60名）平均正常值：94mIUI/mL；

懷孕期女性（60名）平均正常值：1.0mIU/mL；

測得FSH最低濃度為2.5mIU/mL。

十一、單位換算：1ng/ml=4.2mIU/ml的FSH