標題高效液相色譜法測定急支滴丸中柚皮苷的含量

【摘要】目的建立急支滴丸中枳殼主要成分柚皮苷含量的測定方法。方法采用高效液相色譜法,KromasilC18（4.6mm×200mm,5μm）色譜柱,以甲醇-1%醋酸溶液（40∶60）為流動相,流速為1.0mL/min,檢測波長為283nm。結果柚皮苷在0.07～0.35μg之間具有良好的線性關系,r＝0.9998,精密度試驗RSD＝0.3%,穩定性試驗RSD＝2.3%,重復性試驗RSD＝1.29%,平均回收率為98.9%。結論該方法精確度、回收率高,穩定性、重復性好。
　　
　　【關鍵詞】急支滴丸；高效液相色譜法；柚皮苷；含量測定
　　
　　ContentDeterminationofNaringininJizhiDroppillsbyHPLCBAIQing-yunJiangxiYichunCollege,Yichun336000,ChinaAbstract：ObjectiveToestablishHPLCmethodforthedeterminationofnaringininJizhidroppills.MethodsKromasilC18（4.6mm×200mm,5μm）wasused.Themobilephasewasconsistedofacetonitrile-1%acetatesolution（40∶60）.Theflowratewas1.0mL/min.TheUVdetectionwavelengthwasat283nm.ResultsThelinearrangefornaringinwas0.07～0.35μg,r＝0.9998.TheRSDofprecisiontestwas0.3%.TheRSDofstabilitytestwas2.3%.TheRSDofrepeatabilitytestwas1.29%.Theaveragerecoverywas98.9%.ConclusionThemethodofprecisionandrecoverywashigh,andstabilityandrepeatabilitywasgood.
　　
　　Keywords：Jizhidroppills；HPLC；naringin；contentdetermination
　　
　　急支滴丸是由急支糖漿改變劑型而來。急支糖漿為《中華人民共和國藥典》所載成方,由四季青、魚腥草、金蕎麥、枳殼等組成,臨床用于急性支氣管炎、感冒咳嗽、夜間陣發性咳喘、慢性支氣管炎急性發作以及咳痰不爽等癥。為了控制改變劑型后的質量,我們采用高效液相色譜法對其主要成分柚皮苷進行了含量測定,現報道如下。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　Agilent1100Series型高效液相色譜儀,二極管陣列紫外檢測器（德國產）,電子天平。甲醇為色譜純,醋酸為分析純。急支滴丸（黑龍江中醫藥研究院制劑室提供）,柚皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供,批號110722-200309,供含量測定用,純度為99.22%）。
　　
　　2方法與結果
　　
　　2.1色譜條件及系統適用性試驗
　　
　　色譜柱：KromasilC18（4.6mm×200mm,5μm）,以甲醇-1%醋酸溶液（40∶60）為流動相,流速為1.0mL/min,檢測波長為283nm,理論塔板數按柚皮苷峰計算應不低于3000[1]。色譜圖見圖1。
　　
　　2.2對照品溶液的制備
　　
　　精密稱定適量柚皮苷對照品,加甲醇制成35μg/mL溶液即得。
　　
　　2.3供試品溶液的制備
　　
　　將急支滴丸研成粉末,精密稱定0.1700g,置于50mL容量瓶中,加稀乙醇至刻度,搖勻,3000r/min離心,取上清液即得。
　　
　　2.4陰性對照品溶液的制備
　　
　　按“2.3”項下方法制備缺枳殼的陰性對照品溶液。
　　
　　2.5標準曲線繪制
　　
　　取柚皮苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成35μg/mL的溶液。分別精密吸取2、4、6、8、10μL,按“2.1”項下色譜條件,注入液相色譜儀測定。以進樣量為橫坐標,峰面積積分值為縱坐標,繪制標準曲線,得線性回歸方程：Y＝610.7142X＋5.1500,r＝0.9998。結果表明,柚皮苷在0.07～0.35μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。
　　
　　2.6精密度試驗
　　
　　精密吸取對照品溶液5μL,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,連續5次測定峰面積積分值。結果RSD＝0.3%,表明本方法精密度良好。
　　
　　2.7穩定性試驗
　　
　　精密稱取急支滴丸0.1703g,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件設定時間進樣5次,每次精密進樣10μL。結果RSD＝2.3%,表明供試品溶液在24h內穩定。
　　
　　2.8重復性試驗
　　
　　分別精密稱取同一批號急支滴丸5份,按“2.3”項下方法依法制備供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,每份連續進樣2次。結果RSD＝1.29%,表明重復性良好。
　　
　　2.9加樣回收率試驗
　　
　　分別精密稱取同一批號急支滴丸5份,每份約0.1700g,精密稱定,分別加入柚皮苷對照品0.0642mg,混勻后,按照“2.3”項下方法制備供試品溶液溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,結果見表1。5份供試品的平均回收率為98.9%,SX＝1.7535,RSD＝1.8%。表1加樣回收率試驗結果（略）
　　
　　2.10樣品測定
　　
　　取本品10批,按照“2.3”項下方法制備溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,結果見表2。表2柚皮苷含量測定結果（略）
　　
　　3討論
　　
　　流動相系統參照文獻[1-2]。選擇幾種不同比例的溶劑體系：乙腈-水-磷酸、甲醇-1%醋酸溶液、甲醇-水、甲醇-水-醋酸,根據分離情況,最終選擇甲醇-1%醋酸溶液（40∶60）為流動相。
　　
　　根據供試品測定結果,10批供試品中柚皮苷含量的平均值為5.1989mg/g,考慮到投料藥材不同及工藝的波動,按2005年版《中華人民共和國藥典》（一部）規定,枳殼中柚皮苷含量不得低于4.0%,以此限度計算,制劑中柚皮苷含量應按降幅20%計為本品限定值,則其含量應不低于4.1591mg/g,按每丸0.05g計算,則每丸含枳殼以柚皮苷計應不低于0.2mg。本試驗為急支滴丸質量標準提供了可行的量化指標。