標題頂空氣相色譜法測定蠶蛹提取物中有機溶劑殘留量

     目的建立蠶蛹提取物中有機溶劑殘留量的測定方法。方法采用頂空進樣毛細管氣相色譜法，測定了蠶蛹提取物中汽油的殘留量。以70%N,N-二甲基甲酰胺溶液為溶劑，色譜柱為HP-1毛細管柱（30m×0.32mm×0.25μm），FID檢測器。汽化室溫度200℃，檢測器溫度250℃，氮氣為載氣。柱溫為程序升溫：起始溫度為40℃，保持10min，以10℃/min的速率升溫至150℃，保持8min。結果本法線性關系良好，r為0.9976，精密度RSD為1.7%，平均回收率為98%～104%。結論該方法簡便快速，靈敏度高，可作為蠶蛹提取物中有機溶劑殘留量的測定方法。
　　
　　【關鍵詞】頂空氣相色譜法蠶蛹提取物有機溶劑殘留量
　　
　　【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofresidualorganicsolventsinsilkwormpupaextract.MethodsThesamplesweredissolvedin70%N,N-dimethylformamide.MakeanquantitativeanalysisoftheresidualgasolineinsilkwormpupaextractbyheadspacecapillaryGC,andthechromatographicconditionsadoptedwereHP-1column（30m×0.32mm×0.25μm）,andthedetectorwasFID.Theinjectortemperaturewas200℃,thedetectortemperaturewas250℃.Thecolumntemperaturerosebyprogram,theinitialtemperaturewaskeptat40℃for10min，thetemperaturewasraisedto150℃attherateof10℃/min,maintainfor8min.RusultsTherewasagoodlinearity（r=0.9976）,theRSDofprecisionwas1.7%,theaveragerecoverywasintherangeof98%～104%.ConclusionThemethodissimple，rapidandofhighsensitivity,itisanavailablemethodforthedeterminationofresidualorganicsolventsinsilkwormpupaextract.
　　
　　【Keywords】headspaceGC；silkwormpupaextract；residualorganicsolvents
　　
　　蠶蛹提取物是一種作用廣泛、不良反應較少的天然藥物，其主要藥理作用是保護肝臟、增強機體免疫功能等[1]。同時，蠶蛹提取物被廣泛作為保健食品原料藥。蠶蛹提取物由蠶蛹經水解并分離純化制得，在生產過程中使用了無鉛汽油脫脂，其主要含有烷烴類化合物及部分芳香族化合物。因此，有必要對蠶蛹提取物中有機溶劑殘留量進行檢測，以控制產品的質量，樹立品牌優勢，同時適應國際質量標準要求。本文采用頂空進樣毛細管氣相色譜法測定蠶蛹提取物中有機溶劑的殘留量，方法簡便快捷，分析結果令人滿意�，F報告如下。
　　
　　1儀器、試劑及樣品
　　
　　Agilent6890N型氣相色譜儀；Agilent7694頂空進樣器；Agilent化學工作站（A.09.01版）；FID檢測器。
　　
　　二甲基甲酰胺為色譜純；97#無鉛汽油為市售；蠶蛹提取物由浙江得恩德制藥有限公司提供，批號分別為0402301、0402302、0402303。
　　
　　2檢測方法
　　
　　2．1頂空條件因二甲基甲酰胺沸點較高，且對極性小的成分溶解度較好，為保證較高的靈敏度，設定頂空瓶的加熱溫度為85℃，平衡時間為45min。
　　
　　2．2色譜條件與系統適用性試驗HP-1彈性石英毛細管色譜柱（30m×0.32mm×0.25μm）。汽化室溫度200℃，檢測器溫度250℃；氮氣為載氣，分流比為0.2∶1。柱溫為程序升溫：起始溫度為40℃，保持10min，以10℃/min的速率升溫至150℃，保持8min。
　　
　　2.3對照品溶液配制精密稱取汽油對照品適量，加70%N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液配置成濃度約為20μg/ml的溶液，精密量取此溶液5ml置頂空瓶中，加蓋密封，按上述色譜條件進樣，色譜圖見圖1。在所得的色譜圖中，各組分峰的理論塔板數均大于3000，各個相鄰峰的分離度均大于1.5。
　　
　　2.4．1標準曲線的制備與線性范圍精密吸取汽油對照品溶液分別制成5.156、10.312、15.468、20.625、25.780μg/ml的溶液，進行頂空分析，按上述色譜條件進行，測定峰面積。因汽油為混合物，故以峰面積總和進行計算，以峰面積總和為縱坐標（Y），以濃度為橫坐標（X）作線性回歸，得直線方程為Y=10.049X-10.310，r=0.9976。結果表明：濃度在5～25μg/ml范圍內線性關系良好。
　　
　　2.4．2精密度試驗取20μg/ml對照品溶液，平行測定5份，記錄色譜圖，結果峰面積的RSD為1.7%。
　　
　　2.4．3最低檢測限試驗用對照品溶液（5.156μg/ml），采取逐步稀釋法,按上述色譜條件進行，以汽油中一主峰計算信噪比。結果信噪比為3.6時，最低檢測限為26.3ppm。
　　
　　2.4．4回收率試驗精密稱取0402301批樣品約0.05g，置10ml頂空瓶中，精密量取對照品溶液（25.78μg/ml）5ml置頂空瓶中，加蓋密封，按上述色譜條件進樣測定，計算回收率，結果見表1。表1回收率試驗結果
　　
　　2.4．5樣品測定精密稱取3批蠶蛹提取物樣品，各約0.1g，置10ml頂空瓶中，精密加入70%二甲基甲酰胺溶液5ml溶解，加蓋密封。因無鉛汽油為多種成分的化合物，其主要含有烷烴類化合物及部分芳香族化合物，其限度無明確規定，以正己烷和甲苯為指標，參考中國藥典2005年版附錄ⅧP[2]中殘留溶劑的要求，正己烷和甲苯分別為0.029%、0.089%，同時根據樣品測定結果暫定本品含汽油不得過0.015%。按上述色譜條件進樣，以外標法計算，即得。結果3批均未檢出有機溶劑殘留。
　　
　　3討論
　　
　　3.1色譜條件的選擇由于汽油成分較復雜，筆者比較了HP-1毛細管色譜柱、HP-5毛細管色譜柱、HP-50 毛細管色譜柱和DB-624毛細管色譜柱來測定有機溶劑殘留量時，發現HP-1毛細管色譜柱分離最理想，各組分達到良好的分離度和柱效。
　　
　　3.2溶劑的選擇由于汽油極性較小，蠶蛹提取物極性相對較大，采用二甲基甲酰胺作為溶劑時，對照品溶解度較好，而樣品較難溶解，為保證對照品溶液與樣品溶液具有相同的介質，比較了不同比例的二甲基甲酰胺溶液，結果發現采用70%二甲基甲酰胺溶液對對照品及樣品均有較好的溶解度，故選用70%二甲基甲酰胺溶液作溶劑。