標題雞白細胞介素2（IL-2）ELISA試劑盒使用說明書

雞白細胞介素2（il-2）elisa試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用;;;;;;目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中白細胞介素2（il-2）的含量。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞白細胞介素-2（il-2））水平。用純化的雞白細胞介素-2（il-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雞白細胞介素-2（il-2），再與hrp標記的羊抗雞抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞白細胞介素-2（il-2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（od值），通過標準曲線計算樣品中雞白細胞介素-2（il-2）含量。試劑盒組成： 試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存 說明書 1份 1份 ; 封板膜 2片（48） 2片（96） ; 密封袋 1個 1個 ; 酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 標準品：360ng/l 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 顯色劑a液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 顯色劑b液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 23ml×1瓶 2-8℃保存 ;樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。2. 血漿：應根據標本的要求選擇edta或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用pbs（ph7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的pbs，ph7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的pbs（ph7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.7. 不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。操作步驟1.;;;;;;;; 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為240 ng/l，160 ng/l，80 ng/l，40 ng/l，20 ng/l）。2.;;;;;;;; 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.;;;;;;;; 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.;;;;;;;; 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。5.;;;;;;;; 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.;;;;;;;; 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.;;;;;;;; 溫育：操作同3。8.;;;;;;;; 洗滌：操作同5。9.;;;;;;;; 顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.;;;; 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11.;;;; 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。注意事項：1．;試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．;濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．;各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4．;請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本od值大于標準品孔第一孔的od值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。5．;封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．;底物請避光保存。7．;嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8．;所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．;本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。計算：以標準物的濃度為橫坐標，od值為縱坐標，;;; 在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的od;;;;; 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋;;;; ;倍數；或用標準物的濃度與od值計算出標;;;; ;準曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值;;;; ;代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋;;;; ;倍數，即為樣品的實際濃度。;;;;;;;;;;;;;;;; ;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;; ;（此圖僅供參考）;;;試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數r值為0.990以上。2.批內與批見應分別小于9%和11%;檢測范圍：;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;; 15 ng/l -300 ng/l;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;; ;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;; 保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月