高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經濟、環保。

產品概述

腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒酶聯免疫反應測試盒基于競爭性酶聯反應原理，含有腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒(SEM)的抗體已經包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結合。加入底物后，產物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3h，培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現乳化現象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

稀釋倍數：2.0

3）雞蛋【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

6）血清【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應;

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數)。

10．結果計算【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

（1）    分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數)

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數)

例如，肉類樣品的稀釋倍數是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

9012667  Cable, grounding, PCON98, BR8000                  CNY                             

970922     PyroMark Q24 Advanced CpG Kit (4x24)          CNY                             

970460     KRAS Pyro Kit (24)             CNY                             

133202     NeXtalStock Imidazole pH 8.0 (200)                  CNY                             

133188     NeXtalStock Cobalt(III)hexammine (100)                  CNY                             

133187     NeXtalStock Citric acid pH 5.0 (200)                  CNY                             

51126       QIAamp DNA Blood Mini QIAcube Kit (240)             CNY                             

133096     NeXtalStock Potassium phosphate (200)          CNY                             

133095     NeXtalStock Potassium chloride (200)               CNY                              【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

959034     EZ1 RNA Tissue Mini Kit (48)   48 Reagent Cartridges (RNA Tissue) 100 Disposable Tip Holders, 100 Disposable Filter-Tips, 50 Sample Tubes (2 ml), 50 Elution Tubes (1.5 ml), Buffer RLT, RNase-Free DNase I       CNY                             

957336     MagAttract Direct mRNA M48 Kit (192)                   CNY                             

9018448  O-ring, purge port, QX              CNY                             

133172     NeXtalStock CHES pH 8.5 (200)                 CNY                             

133171     NeXtalStock CAPSO pH 9.8 (200)               CNY                             

9018408  Regulator, N2, rear, QX            CNY                             

291045     mericon Screen nos Kit (96)              CNY                             

291025     mericon GMO Screen 35S-pat  (96)                 CNY                             

291013     mericon Screen 35S Kit (24)              CNY                             

9001866  Rotor-Gene Q 5plex (PC) PrioPLUS  "Rotor-Gene Instrument

Installation of Rotor-Gene & Introductory training

Warranty extension to 3 yrs

Loaner available in 2 days*

Annual Inspections (1 onsite PM per yearr)

Priority service provision over non-contract customers

Documented installation & PM report

Unlimited number of repair service

All cost covered (travel, labor, parts)"     CNY                             

9012326  Set Peristaltic Pump Tubing Plato 3000            CNY                             

9012322  Tubing set, peristaltic pump, 1x15 cm              CNY                             

1070195  VacValve Tool (1)               CNY                             

1067933  Buffer RWT (concentrate, 80 ml)              CNY                             

133080     NeXtalStock PEG 20,000 (200)                   CNY                             

38071       AIL Cartridge (1ml)           CNY                              【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

38015       #WGA Cartridge (5ml)               CNY                             

204754     QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (400)              CNY                             

204643     QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (200)             CNY                             

204574     Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit (400)        The Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly sensitive quantification in real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes.         CNY                            

204363     QuantiTect Probe PCR + UNG Kit (200)   The supplied, ready-to-use ｍaster mix contains HotStarTaq DNA Polymerase, ROX passive reference dye, ａnd a dNTP mix in an optimized buffer. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. The UNG enzyme is provided separately. For convenience, the ｍaster mix can be stored at 2–8°C.     CNY                             

9015350  Board, terminal                 CNY                             

9015349  Board, motor controller           CNY                             

9018402  Kit, purge filter, QX           CNY                             

QY-G100  人肝癌細胞     QGY-7701         上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G101  人肝癌細胞     QGY-7703        上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G102  人肝癌細胞     Bel-7402          上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G103  人肝癌細胞     Bel-7404         上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G105  人肝癌細胞     Bel-7405  上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G106  人肝癌細胞     Hep 3B2.1-7           上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G107  人肝癌細胞     SK-HEP-1        上皮細胞         貼壁         DMEM(high glucose)        胎牛血清        

QY-G108  人肝癌亞力山大細胞     PLC/PRF/5         上皮細胞         貼壁         DMEM(high glucose)        胎牛血清        

QY-G109  人高轉移肝癌細胞         HCCLM3   上皮細胞         貼壁         DMEM(high glucose)        胎牛血清        

QY-G110  人膽管細胞型肝癌細胞         HCCC-9810       上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G111  人膽囊癌細胞         GBC-SD   上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       胎牛血清        

QY-G112  人胃癌細胞     BGC-803         上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G113  人胃癌細胞     SGC-7901         上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G114  人胃癌細胞     MGC-803        上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G115  人低分化前胃癌細胞     BGC-823          上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G116  人胃癌細胞     NCI-N87[N87]          上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       胎牛血清         【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

QY-G117  人胃癌細胞     AGS        上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G118  人胃癌細胞(未分化)       HGC-27   上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G119  人食管癌細胞         CaEs-17   上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G120  人食管癌細胞         Eca-109 上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G121  人食管癌細胞         TE-1        上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G122  人食管癌細胞         TE-10       上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G123  人食管癌細胞         TE-11        上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G124  人胰腺癌細胞         PANC-1    上皮細胞         貼壁         DMEM(high glucose)        小牛血清        

QY-G125  人胰腺癌細胞         CFPAC-1    上皮細胞         貼壁         DMEM(high glucose)        小牛血清        

QY-G126  人胰腺癌細胞         PC-3 上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G127  人轉移胰腺癌細胞        AsPc-1     上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G128  人原位胰腺腺癌細胞     BxPC-3      上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清        

QY-G129  人乳腺癌細胞         MCF-7     上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       胎牛血清        

QY-G130  人乳腺癌細胞         ZR75-1     上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       胎牛血清        

QY-G131  人乳腺癌細胞         ZR75-30 上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       胎牛血清        

QY-G132  人乳腺癌細胞         MDA-MB-231          上皮細胞         貼壁         RPMI-1640       小牛血清         【腹瀉性貝類毒素（DSP）檢測試劑盒】

QY-G133  人乳腺癌細胞         MDA-MB-468  上皮細胞         貼壁         Leibovitz’s L-15     胎牛血清