高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經濟、環保。

產品概述

群勃龍檢測試劑盒酶聯免疫反應測試盒基于競爭性酶聯反應原理，含有群勃龍檢測試劑盒(SEM)的抗體已經包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結合。加入底物后，產物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有群勃龍檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【群勃龍檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3h，培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現乳化現象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

稀釋倍數：2.0

3）雞蛋【群勃龍檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

6）血清【群勃龍檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應;

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數)。

10．結果計算【群勃龍檢測試劑盒】

（1）    分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數)

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數)

例如，肉類樣品的稀釋倍數是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

800090     Ready-Run Rxns.               CNY                             

765312     PAXgene TissueFIX Cont. (50 ml) Kit                  CNY                             

132009     EasyXtal 15-Well Tool X-Seal (100)   "100 empty 15-well crystallization plates with X-Seal crystallization supports (5 boxes of 20)

For manual setup of hanging ｄrop crystallization experiments."    CNY                              【群勃龍檢測試劑盒】

762931     Buffer BM3 Wash buffer 8 x 150 ml conc.                 CNY                             

204054     QuantiFast SYBR Green PCR Kit (400)               CNY                             

203741     QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (50)    "Trial Kit: For 50 x 20 µl reactions: 1 x 0.5 ml Fast Cycling Master Mix (2x), RNase-free water, 10 x CoralLoad Fast Cycling Dye, 5 x Q-Solution

-to be used as sample Kit"        CNY                             

159340     Sterile Foam-Tipped Swabs (100)              CNY                             

158906     Cell Lysis Solution (125 ml)                 CNY                             

35061       Ni-NTA HisSorb Plates (5)          5 Ni-NTA-coated, transparent 96-well plates  CNY                             

678891     ipsogen MLL-DUP e2e8 Standards            CNY                             

678591     ipsogen MLL-AF9 e8e10 Standards           CNY                             

678191     ipsogen MLL-AF4 e10e4 Standards           CNY                             

34460       Penta.His HRP Conjugate Kit   125 ul Penta-His HRP Conjugate, 5 g Blocking Reagent, 50 ml Blocking Reagent Buffer (10x concentrate)    CNY                             

32746       EasyXpress Linear Template Fab Kit (100)                 CNY                             

32501       EasyXpress Protein Synthesis Kit (5)         "- Kit for cell-free protein expression in E.coli cell-free extracts.

- The same as the EasyXpress Protein Synthesis Kit (20) (former EasyXpress Protein Synthesis Mini Kit), but only 5 instead of 20 reactions

- Ideal for testing ａnd expression of QIAgenes"       CNY                             

30900       Glutathione HiCap Matrix (10 ml)             CNY                             

28181       QIAquick 96 PCR Purification Kit (4)         For purification of 4 x 96 PCR reactions: 4 QIAquick 96 Plates, Buffers, Collection Microtubes (1.2 ml), Caps        CNY                             

9011595  Tip adapter, 300 µl, 120 mm, v2.04                  CNY                             

9011565  Shaker, 4-plate for Plato 7                 CNY                             【群勃龍檢測試劑盒】

9013185  Tubing, waste, Dispense           CNY                             

9013174  Connector, tubing, 1-8, BR8000                CNY                             

9013169  Tubing, syringe inlet 1, BR8000                 CNY                             

9011433  BGR Z-Motor P1300 Spez. MWG              CNY                             

9011422  Tip Rack Holder, RCS1               CNY                             

9243119  Green Laser Contr. Coherent 115M-13, LC               CNY                             

9243556  HC2, Full Agreement        "Service response time (on-site repair):not applicable

Periodic inspection/maintenance: yes, 1/agreement year

Cost coverage depot repair (parts, labor, packaging, shipping): yes, full coverage

For defect DML, after customer calling QIAGEN technical service hotline before 12 am:

- A special package containing a replacement unit shall be sent to the customer within 2 working days.

- Customer shall send the defect unit to QIAGEN Regional Repair Center following the instructions attached with the packaging.  

For DML owned by customer, QIAGEN Regional Repair Center will send back the repaired original unit to customers within 7-10 working days.

PC, Monitor, Heater, Shaker, Washer, Printer ａnd Votexer:

- A new unit shall be sent to customer within  7-10 working days at no extra cost

- Customer shall send the defect unit to QIAGEN for disposal

- On-site installation of PC ａnd application software is not covered by the agreement

The Preventive Maintenance (PM) service ensures the correct operation of the equipment. During the PM, all the instrument modules are inspected by a qualified QIAGEN service technician. The Preventive Maintenance is performed under the manufacturer guidelines ａnd documented according to GLP / GMP"    CNY                             

101.901-24       #HLA-DQB1*0602; DQA1*0102 incl.Taq (24)           CNY                             

9241033  #Tube insert, 11 mm, sample carr            CNY                             

9242760  #Warranty PLUS 1, Prem/RRL, 1PM,QSYM RGQ              CNY                             

677491     ipsogen NPM1 mut A gDNA MutaQuant Stds          CNY                             

9011164  Roller, deflection, X-drive, BR8000           CNY                             

9010980  BGR 1-er Shaker PK80 (1177)           CNY                             

133215     NeXtalStock MMT pH 9.0 (200)                 CNY                             

NG0361   Xmol/L草酸     6元/100ml                                           

NG0362   Hank’s液      24元/200ml                                         

NG0363   2,4－二硝基苯肼   8元/100ml                                           

NG0364   4.0mol/L氫氧化鈉 8元/100ml                                           

NG0365   任氏液     6元/100ml                                           

NG0366   超氧化物歧化酶SOD檢測試劑盒         1管 比色法                                

NG0367   丙二醛MDA檢測試劑盒       1管 比色法                                

NG0368   黃嘌呤氧化酶XOD檢測試劑盒    1管 比色法                                

NG0369   總抗氧化能力T－AOC檢測試劑盒      1管 比色法                                

NG0370   羥自由基檢測試劑盒     1管 比色法                                 【群勃龍檢測試劑盒】

NG0371   髓過氧化物酶MPO檢測試劑盒   1管 比色法                                

NG0372   過氧化氫酶CAT檢測試劑盒          1管 紫外比色法                                

NG0373   谷胱甘肽－S轉移酶GSH－ST檢測試劑盒 1管 比色法                                

NG0374   谷胱甘肽過氧化物酶GSH－PX檢測試劑盒         1管 比色法                                

NG0375   氧化型谷胱甘肽GSSG檢測試劑盒       1管 比色法                                

NG0376   谷胱甘肽還原酶GR檢測試劑盒  1管 比色法                                

NG0377   還原型谷胱甘肽GSH檢測試劑盒         1管 比色法                                

NG0378   巰基-SH檢測試劑盒       1管 比色法                                

NG0379   單胺氧化酶MAO檢測試劑盒       1管 紫外比色法                                

NG0381   一氧化氮NO硝酸還原酶法檢測試劑盒      1管 比色法                                

NG0382   一氧化氮合成酶誘導型檢測試劑盒     1管 比色法                                

NG0383   一氧化氮合成酶總NOS檢測試劑盒    1管 比色法                                

NG0384   乳酸LD血清、組織檢測試劑盒  1管 比色法                                

NG0385   乳酸LD全血檢測試劑盒       1管 比色法                                

NG0386   乳酸脫氫酶LDH檢測試劑盒         1管 比色法                                

NG0387   ATP酶鈉鉀、鈣鎂ATP酶檢測試劑盒  1管 比色法                                 【群勃龍檢測試劑盒】

NG0388   鈉鉀、鈣鎂ATP酶中任一項檢測試劑盒     1管 比色法                                

NG0389   超微量ATP酶檢測試劑盒     1管 比色法                                

NG0390   鈉鉀、鈣鎂ATP酶中任一項檢測試劑盒                                                   

NG0391   琥珀酸脫氫酶SDH檢測試劑盒    1管 比色法                                

NG0392   肌酸激酶CK檢測試劑盒       1管 比色法                                

NG0393   膽堿酯酶CHE檢測試劑盒    1管 比色法                                

NG0394   乙酰膽堿酯酶T－CHE檢測試劑盒       1管 比色法