高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經濟、環保。

產品概述

勃地酮檢測試劑盒酶聯免疫反應測試盒基于競爭性酶聯反應原理，含有勃地酮檢測試劑盒(SEM)的抗體已經包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結合。加入底物后，產物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有勃地酮檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【勃地酮檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3h，培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現乳化現象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

稀釋倍數：2.0

3）雞蛋【勃地酮檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

6）血清【勃地酮檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應;

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數)。

10．結果計算【勃地酮檢測試劑盒】

（1）    分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數)

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數)

例如，肉類樣品的稀釋倍數是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

978776     PyroMark Custom Assay (200)          CNY                              【勃地酮檢測試劑盒】

180514     GeneRead Size Selection Kit (50)              CNY                             

158788     Gentra Puregene Cell Kit Plus (6.7x109)           CNY                             

677791     ipsogen NPM1 mut B&D cDNA MutaQuant Stds              CNY                             

34366       TAGZyme DAPase Enzyme (50 Units)       For processing of approximately 1 g tagged protein: 50 units DAPase Enzyme, 20 mM Cysteamine-HCl (25 ml)    CNY                             

30761       Ni-NTA Superflow Cartridges (5x5 ml)               CNY                             

28304       QIAquick Nucleotide Removal Kit (50)     50 QIAquick Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)     CNY                             

9011538  Handler unit, BR8000                CNY                             

9013167  Tubing, waste, BR8000             CNY                             

9011415  Plate Turntable for Plato 1/3              CNY                             

9011410  Plate stacker, Detachable (open)              CNY                             

101.901-24U    #HLA-DQB1*0602; DQA1*0102 excl.Taq (24)                   CNY                             

9242761  #Warranty PLUS 2, Prem/RRL, 1PM,QSYM RGQ              CNY                             

675191     ipsogen ETV6-RUNX1 Standards               CNY                             

9011183  BGR Armabdeckung Plato 7              CNY                             

9011145  Holder, stop position magnet, cover, BR8                 CNY                             

9011039  Motor, Z, buffer track, BR8000                 CNY                              【勃地酮檢測試劑盒】

150126     REPLI-g Screening Kit (200)     DNA Polymerase, Buffers, ａnd Reagents for 200 x 40 µl whole genome amplification reactions CNY                             

1014630  Buffer AP1 (200/250),KG           CNY                             

1012508  Penta.His Antibody 96 Plates (100)          CNY                             

997024     Filter-Tips, 1500 µl (1024)                 CNY                             

9018895  Rotor-Disc 100 Rotor                 CNY                             

9018569  Magnet unit, w reflector, EZ1a                 CNY                             

9013155  Calibration pyramid, v1.02                CNY                             

9013074  Magnet, 96-well, Type C           CNY                             

673113     ipsogen JAK2 MutaScreen RS Kit (19)                CNY                             

673223     ipsogen JAK2 MutaScreen EZ Kit (24) CE          CNY                             

672691     ipsogen RARA-PML bcr3 Standards          CNY                             

670115     ipsogen BCR-ABL1 Mbcr Kit (52)               CNY                             

380317     Investigator Triplex AFSQS Kit (400)                  CNY                             

9001527  PyroMark Q96 MD Automated        For performing automated pyrosequncing reaction on the Q96 MD      CNY                            

9001301  QIAsymphony AS               CNY                             

4883004  pg AIV-H5 RT-PCR ASSAY LE               CNY                              【勃地酮檢測試劑盒】

QYS-03314        成纖維細胞轉染試劑     FibroblastTransfectionKit         200Transfections                                 

QYS-03315        上皮細胞轉染試劑盒     EpithelialCellTransfectionKit    100Transfections                                 

QYS-03316        間充質干細胞轉染試劑盒     MesenchymalStemCellTransfectionKit    250Transfections                                 

QYS-03317        星形膠質細胞轉染試劑盒     AstrocyteTransfectionKit          250Transfections                                 

QYS-03318        平滑肌細胞轉染試劑盒         SmoothMuscleCellTransfectionKit   250Transfections                                 

QYS-03319        角質細胞轉染試劑盒     KeratinocyteTransfectionKit    200Transfections                                 

QYS-03320        上皮細胞轉染試劑盒     EpithelialCellTransfectionKit    250Transfections                                 

QYS-03321        體外管腔形成分析試劑盒     InVitroTubeFomationAssayAngiogenesisAssay        50tests/96wellplate                            【勃地酮檢測試劑盒】

QYS-03322        I型膠原細胞粘附檢測試劑盒       CollagenICellAdhesionAssay     48tests/48wellplate                            

QYS-03323        纖維粘連細胞粘附檢測試劑盒     FibronectinCellAdhesionAssay 48tests/48wellplate                            

QYS-03324        膠原I-3D凝膠試劑盒    CollagenI-3DGellingKit    100mg                                 

QYS-03325        膠原I-細胞培養表面包被試劑盒 CollageI-CellCultureSurfaceCoatingKit    10mg                                   

QYS-03326        MTT細胞活力和增殖檢測試劑盒         MTTCellViabilityandProliferationAssay   1000tests/96wellplate                                

QYS-03327        WST-1細胞活力和增殖檢測試劑盒      WST-1CellViabilityandProliferationAssay          1000tests/96wellplate                                 

QYS-03328        細胞衰老檢測試劑盒     CellSenescenceAssay        50tests/53mmplate                            

QYS-03329        LDH細胞毒性檢測試劑盒     LDHCytotoxicityAssay      500tests/96wellplate                                   

QYS-03330        TUNEL色標法細胞凋亡檢測試劑盒     ColorimetricTUNELApoptosisAssay 50tests/96wellplate                            

QYS-03331        活/死細胞檢測試劑盒   Live/DeadCellStainingKit 1000tests/96wellplate                                

QYS-03332        細胞凋亡蛋白酶-3分析試劑盒     Caspase-3Assay        100tests                              

QYS-03333        支原體PCR檢測試劑盒         MycoplasmaPCRDetectionKit 100tests                              

QYS-03334        β-半乳糖苷酶比色檢測試劑盒   Beta-GalactosidaseColorimetricAssay     50tests/53mmplate                            

QYS-03335        LDH細胞毒性檢測試劑盒     LDHCytotoxicityAssay      500tests/96wellplate                                   

QYS-03336        硝基苯酸鈉pNPP磷酸酶檢測試劑盒  pNPPPhosphataseAssay   500tests/96wellplate                                   

QYS-03337        比色法GAPDH分析試劑盒   ColorimetricGAPDHAssay         100tests/96wellplate                                    【勃地酮檢測試劑盒】

QYS-03338        超氧化物歧化酶分析試劑盒         SuperoxideDisutaseAssay         100tests                              

QYS-03339        過氧化氫酶活性分析試劑盒         CatalaseActivityAssay      100tests                              

QYS-03340        谷胱甘肽過氧化物酶分析試劑盒         GlutathionePeroxidaseAssay   100tests                              

QYS-03341        細胞色素C氧化酶含量試劑盒     CytochromeCOxidaseAssay      100Testsincuvette                              

QYS-03342        檸檬酸合成酶的檢測試劑盒         CitrateSynthaseAssay       100Testsincuvette                              

QYS-03343        谷氨酸脫氫酶檢測試劑盒     GlutamateDehydrogenaseAssay     100Testsin96-wellplat                                 

QYS-03344        己糖激酶檢測試劑盒     HexokinaseAssay      100Testsin96-wellplat                                 

QYS-03345        萄糖-6-磷酸磷酸脫氫酶檢測試劑盒    Glucose-6-phosphateDehydrogenaseAssay     100Testsin96-wellplat                                 

QYS-03346        黃嘌呤氧化酶分析試劑盒     XanthineOxidaseAssay     100Testsin96-wellplat